リパーゼを用いた糖脂質の選択的保護・脱保護反応の開発と応用

脂肪酶糖脂选择性保护/脱保护反应的开发及应用

• 批准号: 07856011
• 负责人: 稲垣 穣
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07856011/
• 关键词: リパーゼ; リピドA; 部位選択的反応; アセチル化

1.大腸菌C株LPSの大量培養によるリポ多糖の大量調製反応材料であるリピドAを大量に確保するために大腸菌C株を4%wtのグルコースを炭素源として含む栄養培地6Lを用いてジャーファーメンターによる培養を検討したところ、菌体収量は乾燥脱脂菌体で75gに達した。その菌体から2.25gのLPSを抽出し調製することが出来た。得られたLPSのバクテリオファージφX174のレセプター活性をプラーク計数法を用いて評価したところ、低栄養培地から得られた菌体由来の従来のLPSと全く同等の活性を持っていることが確認された。2.1位脱リン酸型リピドAの調製と分離精製大量に調製したLPSを0.1N HClにより加熱加水分解して1位脱リン酸型リピドA(MLA)を調製した。MLA混合物からゲル濾過カラムクロマトグラフィーに引き続きシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより大腸菌MLAの主成分であるヘキサアシルMLAを単離精製した。その際シリカゲルカラムの溶出にはCHCl_3: MeOH: H_2O=60:10:1の混合溶媒が最も分離能が良いことを見いだした。3.リパーゼを触媒とするリピドAの選択的アセチル化反応単離精製したヘキサアシルMLAを酢酸ビニルをアシル化試薬として加え、酵素リパーゼを触媒とするアセチル化反応を検討したところ、TLC上で新しい化合物の精製を認めた。NMR解析の結果、この生成物はMLAの構成成分である3-ヒドロキシ脂肪酸がアセチル化された物であることが判り、脂肪酸が一旦脱離した後にリパーセによりアセチル化を受けたものと推定された。そこで次に4'位のリン酸をジメチル化した誘導体を調製し、2次元NMRの解析により確認した。このジメチル体についてリパーゼによるアセチル化反応を検討したところ、ゆっくりと反応が進行して低収量(6%)ながら生成物を単離した。^1H NMR分析の結果、アセチル基とMLAの糖鎖及びアシル基の吸収を合わせ持つ化合物であることが判り、リピドAのアセチル化物であることが強く示唆され、現在精密な分析を行っている。

1. Escherichia coli strain C LPS mass culture, A large number of preparation of anti-bacterial material, a large number of guarantees, Escherichia coli strain C, 4% wt, carbon source, including the use of culture medium 6L, culture, a large number of preparations, a large number of dry defatted bacteria up to 75g 2.25g LPS was extracted from the cell. The results showed that LPS activity was higher than that of the control group, and LPS activity was higher than that of the control group. 2.1 The preparation, separation and purification of the deacidified A(MLA) were carried out by heating and hydrolyzing LPS with 0.1N HCl. MLA mixture is purified from the main components of E. coli MLA. The best separation efficiency was obtained when CHCl_3: MeOH: H_2O=60:10:1. 3. The purification of organic compounds by TLC is carried out on the basis of the reaction of organic compounds with MLA and enzymes. The results of NMR analysis showed that the products were composed of 3-hydroxy fatty acids and were estimated to be free of fatty acids. The 4'position of the molecule was determined by 2D NMR. The amount of the product is low (6%). The results of 1H NMR analysis showed that the sugar chain of MLA and the absorption of MLA were closely related to the determination of compounds, and the concentration of MLA and MLA was closely related to the determination of compounds.