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着床前マウス初期胚の増殖・分化を制御する癌細胞由来因子の同定

控制早期植入前小鼠胚胎增殖和分化的癌细胞衍生因子的鉴定

基本信息

批准号：
11760198
负责人：
小林正之
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Akita Prefectural University (2000)Akita Prefectural College of Agriculture (1999)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760198/
关键词：
マウス卵子細胞成長因子肝臓癌細胞体外培養

项目摘要

これまで本研究代表者は、マウスおよびウシ着床前初期胚の体外発育に及ぼすラット肝癌細胞(Reuber H35)の培養上清の効果を検討してきた。その結果、(1)同細胞培養上清中には、マウスの系統にかかわらず作用する2細胞期卵特異的分裂抑制因子(Fr.B25、部分精製終了)が存在するが、ヒト肝癌細胞培養上清中には存在しないこと、(2)同細胞培養上清中には、マウス4細胞期卵の体外発育を促進する効果が認められること、および9種類の蛋白質(76、60、49、38、34、31、24、22および18kD)が卵子に結合すること、(3)同細胞培養上清は、ウシ体外受精卵の体外培養における早期細胞死を抑制することを見い出してきた。本年度の研究では、Reuber H35細胞培養上清中に存在するマウス初期胚発育制御因子と、既知細胞成長因子との作用特性の差異について明らかにするために重要である、以下の結果を得た。1.Fr-B25の構造決定に着手し、分子量を決定した。2.RT-PCR法により遺伝子発現が確認された細胞成長因子に対する抗体を培養液中に添加し、胚発育に及ぼす効果について検討した。その結果、Reuber H35細胞培養上清に認められるマウス初期胚発育促進活性の作用本体の候補として、2種の細胞成長因子を見いだした。3.着床前マウス初期胚の生存性を迅速に定量する事を目的として、酸化還元指示薬であるalamarBlueを応用し、胚発育を定量できる可能性を示した。

This study was conducted on behalf of the in vitro development of preimplantation embryos and the development of supernatant from cultured liver cancer cells (Reuber H35). Results: (1) A 2-cell-stage egg-specific mitotic inhibitor in the supernatant of the same cell culture (Fr. B25, partially purified) 9 kinds of proteins present in supernatant of hepatoma cell culture (Fr. B25, partially purified) 2 kinds of proteins present in supernatant of hepatoma cell culture (Fr. B25, partially purified) 3 kinds of proteins present in supernatant of hepatoma cell culture (Fr. B25, partially purified) 4 kinds of proteins present in supernatant of hepatoma cell culture (Fr. B25, partially purified)(76, 60, 49, 38, 34, 31, 24, 22, and 18kD),(3),(4),(5),(6),(7),(8),(9),(10),(11),(12),(13),(14),(15),(16),(17),(18),(19),(10),(11),(10),(11),( This year's study shows that there are some factors that control embryonic development in the supernatant of Reuber H35 cell culture, and the differences in the action characteristics of cell growth factors are important. The following results are obtained. 1. The structure of Fr-B25 is determined by molecular weight. 2.RT-PCR method for detection of DNA and identification of cell growth factor-related antibodies added to culture medium, embryo development and fruit development The results showed that the supernatant of Reuber H35 cell culture was identified as a candidate for the role of early embryo development promotion activity, and two cell growth factors were identified. 3. Early embryo viability before implantation is rapidly quantified.