自然免疫に関わる新規ヒト血清コレクチンの探索

寻找与先天免疫相关的新型人血清集合素

• 批准号: 11770147
• 负责人: 高山 吉永
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770147/
• 关键词: コレクチン; 補体; MBL; RaRF; PCR; クローニング

補体依存な血清殺菌因子-RaRF-の多糖体結合成分であり,自然免疫に関わるヒト血清コレクチンであるマンノース結合レクチン(MBL)について,1.ヒト肝臓型MBL(MBL-A)cDNAのクローニング,2.遺伝子構造解析,3.蛋白解析を試み,以下の成果を報告する.1.肝臓型MBL塩基配列の相同性によるPCRクローニング(1)マウス,アカゲサルのMBL-AcDNAの塩基配列より,MBL蛋白ドメイン構造,ゲノム構造を考慮してPCRプライマーを設計し,ヒト肝臓cDNAからMBL-A候補cDNAを得た.(2)候補遺伝子はアカゲサル肝臓型MBLcDNAとおよそ78%以上,ヒト血清型MBLとおよそ60%の塩基配列相同性を持ち,演繹されたアミノ酸配列から,ヒト肝臓型MBLはneckドメイン領域に存在する終止コドン変異によりコラーゲンドメインまでしか持たない蛋白として発現していることがわかった.2.遺伝子構造解析(1)候補cDNAの塩基配列を参考にゲノムPCRを行い,ヒト肝臓型MBLゲノム構造を解析した.(2)候補遺伝子は他のMBLと同様N末端,コラーゲン,neck及びCRD4つのドメインから成るエクソンを構成しており,cDNAとの比較からスプライシングの違いにより2種類のmRNAから2種類の不完全蛋白が発現している可能性が示唆された.3.蛋白解析(1)蛋白解析に用いるリコンビナント蛋白を作製するために,バキュウロウイルスベクター系を用いて,RaRF構成蛋白の内,MASP1,MASP2,MBL(血清型,肝臓型)の各発現コンストラクトを作成し,発現ウイルスクローンを得た.(2)同じく,RaRF構成蛋白に特異的な抗体を得るために,1リットルのヒト血清からRaRF複合体を精製し,これを免役して各種モノクローン抗体を得た.

Complement-dependent Serum Vitamin Factor-RaRF-Polysaccharide Binding Components, Natural Immunity Related to Serum Protein, 1. Liver MBL (MBL-A)cDNA Sequence, 2. Gene Structure Analysis, 3. Protein Analysis, The following results are reported: 1. Liver MBL Gene Sequence Identity PCR (1). MBL-A cDNA sequence was obtained by PCR design considering MBL protein structure and MBL protein cDNA sequence. (2)The candidate gene has more than 78% identity in the gene sequence of the AKGISURU liver type MBL cDNA and 60% identity in the gene sequence of the NIST serotype MBL, demonstrating the similarity between the AKGISURU liver type MBL cDNA and the NIST serotype MBL cDNA. 2. Analysis of cDNA Substructure (1) Reference of cDNA Base Alignment, Analysis of cDNA Base Alignment, Analysis of cDNA Base Structure, Analysis of cDNA Base Alignment, Analysis of cDNA Base Alignment, Analysis of cDNA Base Structure, Analysis of cDNA Base Alignment, Analysis of cDNA Base Structure, Analysis of cDNA Base Alignment, Analysis of cDNA Base Structure, Analysis of cDNA Base Alignment, Analysis of cDNA Base Structure, Analysis of cDNA Base Alignment, Analysis of cDNA Base Alignment, (2)Candidate genes are composed of MBL and N-termini of the same type, and the cDNA,neck and CRD4 are used to construct the protein. Comparison of cDNA and cDNA shows the possibility of the expression of two kinds of mRNA and two kinds of incomplete protein. 3. Protein analysis (1) Protein analysis RaRF component proteins, MASP1, MASP2,MBL(serotype, liver type), were prepared and found to be useful in the development of the RaRF component proteins. (2)The RaRF complex was purified from the RaRF serum, and the RaRF antibody was isolated from the RaRF protein.