補体活性化血清殺菌因子-RaRF-と易感染性体質との遺伝学的研究(遺伝子診断技術への応用)

补体激活血清杀菌因子-RaRF-与易感体质的遗传学研究（应用于基因诊断技术）

• 批准号: 07770204
• 负责人: 高山 吉永
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770204/
• 关键词: 補体; セリンプロテアーゼ; 遺伝子構造; 遺伝子診断; 多型解析

RaRFの遺伝子構造を決定し,ついでその構成成分であるP100プロテアーゼとレクチンMBPの変異の多様性を明らかにし, RaRFと易感染性との関係を調べ,将来的には易感染性体質の遺伝子診断法への応用等の成果を期待して本研究を実施している.本年度は, P100成分のゲノム遺伝子構造の決定,遺伝子の多型(多様性)解析のための基礎的な条件設定の検討,及びスクリーニング対象サンプルの収集を行った.1.ヒトP100蛋白の遺伝子構造(1) P100蛋白をコードしているゲノム遺伝子の上流域に新たなエクソンの存在が明らかとなり,その結果,P100蛋白は16エクソンで全長36kb以上にわたっていることが明らかになった.(2)プロテアーゼ領域を構成するエクソンのコドンの接合部の特徴から, P100はこれまでに知られているどのセリンプロテアーゼとも異なった分子進化をしていることが推定された.2.ヒトP100遺伝子の多型解析(1)エクソン増幅に用いるPCRプライマーを設計するために,イントロン内部の正確な塩基配列を決定した.(2)各エクソンを特異的に増幅するためのPCR条件を検討した.全16エクソン中15エクソンについてPCR増幅を試み,これまでに8エクソンについて特異的な増幅が可能な条件を設定した.3.サンプル収集当大学病院小児科学教室の協力を得ておよそ60サンプル分のゲノムDNAを収集した.4.今後の展開(1)すべてのエクソンを増幅するPCR条件を設定する.(2)収集した患者サンプルと一般正常人サンプルとの間で各エクソン毎のPCR-SSCPによる多型検索を行い,エクソン内での多型の存在を同定する.(3)見つかったすべての多型部分の塩基配列を決定する.

The genetic structure of RaRF is determined, the composition of RaRF is determined, the diversity of RaRF and MBP is clarified, the relationship between RaRF and susceptibility is adjusted, and the future results of genetic diagnosis of susceptible constitution are expected. This year, the determination of the P100 protein gene structure, the discussion of the basic conditions for the analysis of the polymorphism of the gene, and the implementation of the collection of the P100 protein gene structure (1) the P100 protein gene structure (1) the existence of the new P100 protein gene in the upstream region of the P100 protein, P100 protein is more than 36kb in length. (2)2. Polytype analysis of P100 gene (1) Polytype analysis of P100 gene (2) Polytype analysis of P100 gene (1) Polytype analysis of P100 gene (2) Polytype analysis of P100 gene (3) Polytype analysis of P100 gene (3) Polytype analysis of P100 gene (2) Polytype analysis of P100 gene (3) Polytype analysis of P100 gene (3) Polytype analysis of P100 gene (4) Polytype analysis of P100 gene (3) Polytype analysis of P100 gene (4) Polytype analysis of P100 gene (3) Polytype analysis of P100 gene (4) Polytype analysis of P100 gene (3) Polytype analysis of P100 (2)The PCR conditions for each individual sample were discussed. 15 out of 16 solutions for PCR amplification test, this is 8 solutions for specific amplification conditions set. 3. Solutions for the collection of PCR DNA from the collaboration of small science classrooms in university hospitals. 4. Future development (1) for PCR amplification conditions set. (2)The PCR-SSCP polymorphism in patients and normal individuals is characterized by the presence of multiple patterns in different systems. (3)See also the determination of the base alignment of the polytype part.