モノクロナル抗体が強制的に誘導するヌードマウス発毛メカニズムの解明

阐明单克隆抗体诱导裸鼠毛发生长的机制

• 批准号: 15659071
• 负责人: 高山 吉永
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659071/
• 关键词: 発毛誘導; ヌードマウス; モノクロナル抗体

I.発毛誘導モノクロナル抗体の認識する抗原の同定1.発毛誘導モノクロナル抗体の認識する抗原の同定新たにクローニングした発毛誘導モノクローナル抗体(3D7)産生ハイブリドーマ細胞を接種したヌードマウス約40匹より,およそ280ml分の腹水液を採取した.これらの腹水液150ml分からプロテインGアフィニティクロマトグラフィー法により3D7抗体を精製し,およそ400mgの精製抗体を得た.2.ヒト血清からの抗原精製ヒト(ボランティア)血清100mlからマンノースカラムクロマトグラフィーにより高マンノース結合性成分を粗精製し,ついでキトオリゴ糖カラムクロマトグラフィーにより糖鎖結合性成分を精製した.精製抗原を3D7抗体と,コントロールとして抗ヒトマンノース結合レクチン(MBL)抗体を用いたウエスタンブロッティングとにより比較分析し,精製抗原中にMBL成分と異なる分子量32-34KDaのタンパク成分の存在を確認した.3.3D7抗体カラムクロマトグラフィーによる抗原精製3D7抗体を用いてアフィニティ抗体カラムを作製し,キトオリゴ糖カラム精製抗原画分からの3D7抗体結合タンパクのアフィニティ抗原精製を行なった.II.精製抗体による発毛の再現実験動物として市販されているヌードマウスは一般に1ヶ月齢ほどである.一方,およそ3ヶ月齢未満のヌードマウスは微量ながら周期的な産毛の発毛サイクルを繰り返しているものがほとんどである.そこで,12ヶ月齢以上独自に飼育し,外観上は発毛サイクルが完全に認められなくなった加齢ヌードマウスに対して本モノクロナル抗体の接種を1mg/回,3日毎に計6回行なった所,若いマウスに見られた発毛化現象は観察されなかった.このことから,本抗体による発毛化現象は毛の新生を誘導すると考えるよりはむしろ毛再生における産毛の脱落消退を防ぎ,毛成長強化作用に関係しているものと推測される.細菌は、増殖の定常期状態やアミノ酸・糖などの栄養が枯渇した環境、あるいは酸化的ストレスなどのストレス環境下では、緊縮応答(stringent response)によってこれらの環境変化に適応し、生存を可能にする。本研究は、Salmonell enterica serovar Typhimuriumにおいて、ppGppにより遺伝子発現調節される病原因子を同定し、マクロファージ細胞内環境への適応メカニズムを解明することを目的とする。平成16年度は、アガロース二次元電気泳動法(アガロース2-DE)を用いたppGppにより発現調節される因子の同定を試みた。まず、S.Typhimurium ATCC1402ナリジクス酸耐性株SH1OO(親株)とrelA spoT二重変異株を様々な培養条件下において培養し、全菌体たん白質をアガロース2-DEにより、展開・分離した。また、平成15年度に同定したppGPPにより発現制御される3っのビルレンス形質、Salmonella pathogenicity island 1(SPI-1)、Salmonella pathogenicity island 2(SPI-2)、およびspv領域のたん白質が実際にrelA spoT二重変異株において発現が低下していることを確認するために、それぞれの変異株を同じ条件下で培養し、全菌体たん白質を比較した。現在、すでに同定されたもの以外のたん白質についていくつか確認し、LC-MS/MSを用いて、同定することを行っている。本研究の成果から、ppGppによって制御される遺伝子を同定し、さらに、マクロファージ内においてSalmonellaの増殖に必要な遺伝子を分離するための基礎的なデータを得ることができたものと考えられる。

I. Identification of Antigen for Hair Induction of Antibodies Recognition 1. Identification of Antigen for Hair Induction of Antibodies Recognition (3D7) Production of Antigen for Hair Induction of Antibodies Inoculation of Cells Approximately 40 Pieces, Approximately 280ml of Ascites Fluid Collection. 3D7 antibody was purified by the method of purification of ascites fluid 150ml. 400mg of purified antibody was obtained. 2. Serum was purified by antigen purification. Serum 100ml was purified by the method of purification of high binding components. The sugar chain binding component is refined. Refined antigen: 3D7 antibody: 3D7 antibody: 3D7 antibody: 3 II. Purification of Antibodies and Reproduction of Hair in Animals and in the Market. A party, For example, if you are 12 months old, you will be raised alone. If you are 12 months old, you will be inoculated with the antibody 1mg/time. If you are 12 months old, you will be inoculated with the antibody 1mg/time. This antibody is believed to be related to the induction of hair regeneration, the prevention of hair loss, and the enhancement of hair growth. The bacteria grow in a steady state of acid, sugar and nutrition, and survive in an acidic environment, a stringent response, and an environment that is suitable for survival. This study aimed to clarify the regulation of pathogenic factors in Salmonell enterica serovar Typhimurium, ppGpp and intracellular environment. In 2016, the two-dimensional electrokinetic method (2-DE) was used to determine the identity of the regulatory factors. S.Typhimurium ATCC1402 is a resistant strain to acid. Under the culture conditions, the whole cell is cultured in a straight line. In 2015, the same level of PPGPP was established, and three lines were produced under the same culture conditions. The lines of Salmonella pathogenicity island 1(SPI-1), Salmonella pathogenicity island 2(SPI-2), and spv fields were compared. Now, the same time, the same time, the same time. The results of this study are as follows: 1. The genetic diversity of Salmonella is the same as that of Salmonella.