C型肝炎ウイルスNS5A蛋白によるインターフェロン抗ウイルス活性の抑制の解析

丙型肝炎病毒NS5A蛋白抑制干扰素抗病毒活性的分析

• 批准号: 11770159
• 负责人: 長野 基子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770159/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; 非構造蛋白NS5A; インターフェロン; 抗ウイルス活性; 2-5A合成酵素; 遺伝子多様性; シグナル伝達

我々はC型肝炎ウイルス(HCV)NS5A蛋白によるインターフェロン(IFN)抗ウイルス活性の抑制にPKR経路だけでなく、2-5A合成酵素(2-5AS)/RNaseL経路も関与している可能性を示唆してきた。そこで、NS5Aが2-5ASと結合しIFNの抗ウイルス活性を抑制するのではないかと考え、実験を行った。まず、NS5AおよびHAタグ付き2-5ASを共発現する細胞抽出液を用い、抗HA抗体あるいは抗NS5A抗体による免疫沈降を行った。抗HA抗体を用いた場合には、両蛋白の結合が認められたが、抗NS5A抗体を用いた時にははっきりとした結合はわからなかった。そこで、NS5Aを効率よく精製するためにGST融合NS5AおよびHAタグ付き2-5ASを共発現する細胞抽出液を用い、グルタチオンビーズによるプルダウンアッセイを行った。すると両蛋白の結合がはっきりと認められた。またこのとき、抗HA抗体を用いて免疫沈降しても両蛋白の結合が認められた。さらに、GST融合2-5ASおよびNS5Aを共発現する細胞抽出液を用い、グルタチオンビーズによるプルダウンアッセイも行った場合にも両蛋白の結合が顕著に認められた。そこでこの後の解析にはこの方法を用いた。両蛋白の結合領域について検討を行ったところ、NS5Aはaa27-149領域で結合し、2-5ASはN末端領域よりもC末端領域でより結合することがわかった。またNS5Aの欠失変異体(NS5AΔC298:aa1-149)はNS5A全領域よりも2-5ASにより多く結合することが明らかとなった。さらに、NS5A内のInterferon sensitivity determining region(ISDR)配列あるいはサブタイプの違いによって両蛋白の結合量に差異が認められるか否かについて検討したが、株間で有意な差は認められなかった。

Hepatitis C (HCV) NS5A protein (IFN) antiviral activity inhibits the activity of PKR pathway, 2-5A synthase (2-5AS)

项目成果

Apichartpiyakul,C: "Seroprevalence and subtype distribution of hepatitis C virus among blood donors and itravenous drug users in Northern/Northeastern Thailand"Jpn.J.Infect.Dis. 52(1). 121-123 (1999)

Apichartpiyakul,C：“泰国北部/东北部献血者和静脉吸毒者中丙型肝炎病毒的血清流行率和亚型分布”Jpn.J.Infect.Dis。

Lusida,Maria Inge: "Viral load in Indonesian patients with chronic liver disease and in blood donors infected with different subtypes of hepatitis C virus."Jpn.J.Infect.Dis.. 53. 67-69 (2000)

Lusida, Maria Inge：“印度尼西亚慢性肝病患者和感染不同亚型丙型肝炎病毒的献血者的病毒载量。”Jpn.J.Infect.Dis.. 53. 67-69 (2000)

Song,Jian: "Nuclear localization, intramolecular cleavage of N-terminally deleted NS5A protein of hepatitis C virus."Virus Res.. 69. 109-117 (2000)

宋健：“丙型肝炎病毒N末端删除的NS5A蛋白的核定位、分子内裂解。”Virus Res.. 69. 109-117 (2000)

Handajani,Retno: "Prevalence of GB virus C/hepatitis G virus (GBV-C/HGV) infection among various populations in Surabaya, Indonesia, and identification of novel groups of sequence variants."J.Clin.Microbiol.. 38(2). 662-668 (2000)

Handajani, Retno：“印度尼西亚泗水不同人群中 GB 病毒 C/G 型肝炎病毒 (GBV-C/HGV) 感染的流行情况，以及新型序列变异组的鉴定。”J.Clin.Microbiol.. 38(2

Song, Jian: "The NS5A protein of hepatitis C virus partially Inhibits the antiviral activity of interferon." J.Gen.Virol.80(4). 879-886 (1999)

宋健：“丙型肝炎病毒的NS5A蛋白部分抑制干扰素的抗病毒活性。”