C型肝炎ウイルスNS5A蛋白によるインターフェロン阻害作用の分子機序の研究

丙型肝炎病毒NS5A蛋白抑制干扰素的分子机制研究

• 批准号: 15790240
• 负责人: 長野 基子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790240/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; 非構造蛋白NS5A; インターフェロン; 抗ウイルス活性; HCV RNAレプリコン; IL-8; NS4A; NS4B; 2-5A合成酵素; アミノ酸変異

C型肝炎ウイルス(HCV)NS5A蛋白について、NS5A発現細胞およびHCV RNAレプリコン(NS3-NS5B)複製細胞(レプリコン細胞)を用いて(i)IFN作用分子である2-5A合成酵素とNS5Aが結合すること、(ii)チャレンジウイルスを用いたウイルスレスキュー実験により、両細胞が対照細胞に比較してIFN抗ウイルス活性を抑制すること、などをこれまでに明らかにしてきた。本研究では、このIFN抗ウイルス活性抑制に関与するISDR(IFN sensitivity determining region)内のアミノ酸配列およびIL-8の誘導について検討した。IFN治療により血中HCV RNAが持続的あるいは一時的に消失した患者由来HCV株の解析によりIFN感受性に重要と考えられた244Thr、246His、255IleをそれぞれAla、Cys、Valに同時に置換した変異型レプリコン細胞を作製した。ウイルスレスキュー実験により、この変異型レプリコン細胞はwtレプリコン細胞と同等の抗ウイルス活性抑制を示した。このことからレプリコン細胞におけるIFN抗ウイルス活性抑制にはこれら以外のアミノ酸も大事であることが示唆された。さらに、HCVによるIFN抗ウイルス活性抑制にはNS5Aが惹起するIL-8の誘導が関与するとの報告があることからレプリコン細胞におけるIL-8の誘導について検討した。レプリコン細胞では対照細胞に比較してIL-8のプロモーター活性が約2倍上昇していた。またIL-8 mRNA発現量も対照細胞の約2倍、細胞上清中の分泌IL-8量も約2倍と有意に増加していた。各々のHCV非構造蛋白発現細胞を用いた結果から、レプリコン細胞におけるIL-8発現増加にはNS5AよりNS4BとNS4Aが特に関与していることが示唆された。

Hepatitis C virus (HCV) NS5A protein expression, NS5A development cells and HCV RNA expression (NS3-NS5B) Replicating cells (i.e., NS5A cells) were treated with (i)IFN-acting molecules that bind to NS5A synthase, and (ii) IFN-acting molecules that bind to NS5A synthase. In this study, we investigated the relationship between the inhibition of IFN anti-tumor activity and the induction of IL-8 in ISDR(IFN sensitivity determining region). HCV RNA in the blood was removed from the patient's serum and the HCV strain was analyzed. IFN sensitivity was examined. Ala, Cys, Val were replaced simultaneously. The cells of different types are inhibited by the same anti-cell activity. This is the first time that we've seen this. In addition, the inhibition of IFN-γ activity by HCV is related to the induction of IL-8 by NS5A. The activity of IL-8 increased by about 2-fold compared with control cells. IL-8 mRNA production was about 2-fold higher than that of irradiated cells, and IL-8 production in cell supernatant was about 2-fold higher than that of irradiated cells. IL-8 production in HCV non-structural protein-producing cells increased significantly in NS5A, NS4B and NS4A.

项目成果

Hepatitis C virus NS5A protein interacts with 2',5'-oligoadenylate synthetase and inhibits antiviral activity of interferon in an ISDR-independent manner.

丙型肝炎病毒 NS5A 蛋白与 2,5-寡腺苷酸合成酶相互作用，并以不依赖 ISDR 的方式抑制干扰素的抗病毒活性。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J Gen Virol 85
• 作者: Sacco R.;Tsutsumi T.;Suzuki R.;Otsuka M.;Aizaki H.;Sakamoto S.;Matsuda M.;Seki N.;Matsuura Y.;Miyamura T.;Suzuki T.;Taguchi Takashi
• 通讯作者: Taguchi Takashi

Oka, Kiyomasa: "Hepatitis C virus core protein selectively inhibits synthesis and accumulation of p21/Waf1 and certain nuclear proteins."Microbiol.Immunol.. 47(6). 429-438 (2003)

Oka，Kiyomasa：“丙型肝炎病毒核心蛋白选择性抑制 p21/Waf1 和某些核蛋白的合成和积累。”Microbiol.Immunol.. 47(6)。

Ogata, Satoshi: "Identification of hepatitis C virus (HCV) subtype lb strains that are highly, or only weakly, associated with hepatocellular carcinoma on the basis of secondary structure of an amino-terminal portion or the HCV NS3 protein."J Clin Microbi

Ogata, Satoshi：“基于氨基末端部分或 HCV NS3 蛋白的二级结构，鉴定与肝细胞癌高度或仅弱相关的丙型肝炎病毒 (HCV) 亚型 lb 株。”J Clin Microbi

Cleavage of the hepatitis C virus NS5A protein by caspase-3 in the interferon sensitivity-determining region in a sequence-dependent manner.

• 发表时间: 2004
• 期刊: The Kobe journal of medical sciences
• 作者: R. Hidajat;M. Nagano‐Fujii;Lin Deng;H. Hotta

Ishido, Satoshi: "c-MIR, a human E3 ubiquitin ligase, is a functional homolog of herpesvirus proteins MIR1 and 2 and has similar activity."J Biol Chem. 278(17). 14657-14668 (2003)

Ishido, Satoshi：“c-MIR 是一种人类 E3 泛素连接酶，是疱疹病毒蛋白 MIR1 和 2 的功能同源物，具有相似的活性。”J Biol Chem。