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固定化酵素カラムを用いる新生児マススクリーニングのための三成分同時定量法の開発

使用固定化酶柱开发用于新生儿大规模筛查的三组分同时定量方法

基本信息

批准号：
11770203
负责人：
伊藤克敏
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本申請では先天性代謝異常症のフェニルケトン尿症、メイプルシロップ尿症及びガラクトース血症の新生児マススクリーニングの指標となるフェニルアラニン(Phe)、ロイシン(Leu)及びガラクトース(Ga1)を迅速かつ簡便に定量することを目的として、各デヒドロゲナーゼ(DH)の固定化酵素カラムを用いたセミミクロHPLC装置での三成分同時定量法を検討し,本年度は以下の成果を得た。固定化酵素カラムは各DHをTSKgel TRESYL-5PWに結合させ、カラム(1.5mmφ×100mm)に充填し調製した。装置は4本のカラム(固定化酵素カラム3種及び非固定化酵素カラム)を高圧六方バルブにそれぞれ接続し、100μL/minで送液した。試料溶液5μLをカラムに導入し、生じたNADHを蛍光検出した。この操作を4回行い、カラムスイッチングでそれぞれのカラムに試料を導入することにより、3成分の濃度を定量した。試料は血色素を固定した3mmφの血液ろ紙1枚を20mM NADを含む緩衝液50μLで抽出して調製した。上記の方法により、3mmφの血液ろ紙ディスク1枚から18分間で3成分を同時に測定できた。最適条件下において標準血液ろ紙ディスクでの検量線はPhe;0.3-19.6mg/dL、Leu;0.8-18.4mg/dL、Gal;04-18.2mg/dLで直線性を示し、現在マススクリーニングで行われているカットオフレベルを十分カバーした。日内変動はPhe;0.7-2.3%、Leu;1.0-2.2%、Ga1;0.4-2.4%(CV、n=5)と良好であった。次年度は臨床サンプルの測定を行い本法の有用性について検討を行う。

This application is for the treatment of inborn errors of metabolism, including congenital metabolic syndrome, congenital urinary syndrome, congenital metabolic syndrome, congenital urinary syndrome, and congenital anemia. The indicators of raw material include Phe, Leu and Leu.ース(Ga1)をquick and easy にquantitative することをpurpose として, various デヒドロゲナーゼ(DH) immobilized fermentation The three-component simultaneous quantification method using a いたセミミクロ HPLC device was used for primordial ingredients, and the following results were obtained this year. The immobilized enzyme KARALA is prepared by combining each DH and TSKgel TRESYL-5PW and KARARA (1.5mmφ×100mm) by filling it. The device consists of four high-voltage hexagonal enzymes (three types of immobilized enzyme enzymes and non-immobilized enzyme enzymes) and a liquid delivery system of 100 μL/min. 5 μL of the sample solution was introduced into the sample solution, and NADH was produced and the sample solution was extracted.このoperationを4行い、カラムスイッチングでそれぞれのカラThe test sample is introduced into the test sample and the concentration of the three components is measured. The sample consists of 1 piece of 3mmφ blood paper containing fixed hemoglobin and 50 μL of buffer containing 20mM NAD, and then extracted and prepared. The method mentioned above is a 1 piece of 3mmφ blood test paper, which can be divided into 18 parts and measured at the same time with 3 components. Under optimal conditions, the standard blood test line is Phe; 0.3-19.6mg/dL, Leu; 0.8-18.4mg/dL , Gal; 04-18.2mg/dL linearity indicator, now Mashikoクリーニングで行われているカットオフレベルを十カバーした. Intraday changes include Phe; 0.7-2.3%, Leu; 1.0-2.2%, Ga1; 0.4-2.4% (CV, n=5), and good performance. In the following year, the effectiveness of clinical testing of this method will be determined.