DNA相同組換えを利用した結核ワクチン開発のための基礎研究

利用DNA同源重组开发结核疫苗的基础研究

• 批准号: 11770306
• 负责人: 松葉 隆司
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770306/
• 关键词: DNA相同組換え; recA; intein; マイコバクテリア

1.構造の異なる合成DNAを基質としてintein蛋白の基質特異性を検討したが、基質間における有意な結合能の差は認められなかった。2.野生型および一アミノ酸変異をもつ変異型intein蛋白をそれぞれ精製し、recA蛋白によるDNA組換え反応に対する影響を試験管内反応系で検討した。野生型と変異型inteinのDNA組換え効率に対する影響は異なり、変異型inteinは組換え反応を濃度依存性に著しく抑制した。一方、RecA蛋白によるDNA組換え反応を促進する因子である一本鎖DNA結合蛋白(SSB)として、大腸菌SSBをMycobacterium bovis(BCG)由来のrecA蛋白の反応系に用いると、大腸菌recA蛋白で必要なSSB量と比べ多量のSSBが、同等の反応産物を得るのに必要とされた。この結果は、マイコバクテリア由来のrecAやintein蛋白による本来の活性に、種特異的なSSBの必要性を暗示させた。RecA蛋白以外にも、DNA組換えや修復に関与する因子が存在するので、DNA修飾酵素とintein蛋白の関連性を検討した。DNAの相同領域の連結酵素であるT4リガーゼは、制限酵素消化で直鎖状としたφX174DNAと混合するとDNAを環状化しスーパーコイル化を誘導する。この反応系にintein蛋白を加えると、DNA間の連結によりDNA長鎖化が誘導される。この結果は、intein蛋白がDNA結合蛋白と協力し、生体内でDNAの機能維持に何らかの役割を担っている可能性を示唆するが、より直接的証拠を得るため更に詳細な解析が必要とする。3.Inteinを含むrecA遺伝子をゲノム上に残したまま、inteinを除去した成熟型recA遺伝子をゲノム上にインテグレートさせ、その発現蛋白によるDNA組換え効率の変化測定を試みているが、intein蛋白が依然存在するためか、有意な効率変化は認められない。完全にinteinを除去した形での解析が必要かもしれない。

1. の different structures な る synthetic DNA を matrix と し て intein protein の substrate specificity を beg し 検 た が, matrix に お け る intentionally な binding energy poor の は recognize め ら れ な か っ た. 2. Wild type お よ び a ア ミ ノ acid - different を も つ - alien intein protein を そ れ ぞ れ refined し, rec a protein に よ る DNA group in え anti 応 に す seaborne る influence を test tube anti 応 department で beg し 検 た. Wild type と - alien intein の DNA group in え sharper rate に す seaborne る influence は different な り, - alien intein は group in え anti 応 を concentration dependence に the し く inhibit し た. One side: RecA protein によるDNA exchange え reverse 応を promoting する factor である locking DNA-binding protein (SSB)と て て escherichia coli SSBをMycobacterium Bovis (BCG) origin の rec a protein の anti に 応 department with い る と, coliform で rec a protein necessary な と SSB quantity amount is more than べ の SSB が, product equally の anti 応 を る の に necessary と さ れ た. こ の results は, マ イ コ バ ク テ リ ア origin の rec a や intein protein に よ る の active に, originally species specific な SSB の necessity を suggested さ せ た. Rec a protein outside に も, DNA group in え や repair に masato and す る factors が す る の で, DNA modification enzyme と intein protein の masato even sex を beg し 検 た. DNA の same field の link enzyme で あ る T4 リ ガ ー ゼ は limitations and enzyme digestion で straight lock と し た phi X174DNA と mixed す る と DNA を annular turn し ス ー パ ー コ イ ル change induced す を る. <s:1> <s:1> anti応 line にintein protein を plus えると, DNA <s:1> linking によ <s:1> DNA long locking が induces される. こ の results は, が intein protein, DNA binding protein と together し, raw で の DNA in the body function to maintain what に ら か の "を cut bear っ て い を る possibility in stopping す る が, よ り direct evidence 拠 を must る た め に more detailed analytical が な necessary と す る. Contains 3. Intein を む rec a posthumous son 伝 を ゲ ノ ム に on residual し た ま ま, Intein を remove し た mature rec a heritage 伝 son を ゲ ノ ム on に イ ン テ グ レ ー ト さ せ, そ の 発 now protein に よ る DNA group in え の sharper rate - the determination を try み て い る が, Intein protein が remain す る た め か, intentionally な unseen The rate of change is められな められな. Complete にinteinを to remove the た た form で <s:1> analysis が necessary れな れな れな.