東アジアに蔓延する結核菌の高病原性化関連因子群の解析

东亚地区结核杆菌高致病性相关因素分析

• 批准号: 21K10396
• 负责人: 松葉 隆司
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyushu University of Health and Welfare
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10396/
• 关键词: 結核菌; 病原因子; 変異; 結核; 病原性; 機能

結核菌は遺伝子レベルの違いによって8つの系統株に分類されている。これらの結核菌系統株のなかでも日本を含む東アジア地域に蔓延し、世界各地でアウトブレーク原因となる株に対しては、有効な予防や治療対策がない。また、このような結核菌株に特有な性状を付与する原因因子やそれら因子による効果についても明らかにされていない。遺伝子系統株特異的な変異をもつ遺伝子群は、各遺伝子産物機能活性の亢進、低下あるいは機能不全が変異によって生じる可能性があるため、単独あるいは複合的な効果として結核菌の高病原性化や薬剤耐性化に関連しているのかもしれない。本年度は、系統株間で異なる病原性状を生み出す可能性ある遺伝子変異群に関して、変異を持つ遺伝子と変異のない遺伝子から各タンパクを産生する組換え大腸菌を遺伝子組換え実験により作出した。各組換えタンパクの発現については、菌抽出液を電気泳動法およびタグ抗体を用いたウエスタンブロット法による確認を試みた。しかしながら、大腸菌組換え発現系での各タンパク発現は、いづれのクローンにおいても認められなかった。そこで、大腸菌組換えタンパクとしての発現が認められない場合に有効とされるベクターや発現宿主となる大腸菌株を用いたタンパク発現系での試みを行なったが、タンパク発現は同様に認められなかった。目的とする結核菌タンパク群は、マイコバクテリアによる組換えタンパク発現系が必要と考えられた。　今後は、マイコバクテリア組換えタンパク発現系ベクターにクローニングし解析を試みる。

基于遗传差异，结核分枝杆菌分为八个菌株。在这些结核分枝杆菌菌株中，没有有效的预防性或治疗措施在包括日本在内的东亚普遍存在，并引起世界各地的爆发。此外，尚未阐明赋予结核分枝杆菌菌株及这些因素的特性的原因因素以及这些因素的影响。具有特异性基因菌株的突变的基因可能与结核分枝杆菌的过度人有关和耐药性有关，因为突变是由于突变而单独或组合的。今年，关于可能在菌株之间可能产生不同致病特性的基因突变，以及突变的基因和未突变的基因，将重组大肠杆菌产生。尝试使用TAG抗体来确认每种重组蛋白的表达，以通过电泳和蛋白质印迹确认细菌提取物。但是，在任何克隆中都没有观察到大肠杆菌重组表达系统中的蛋白表达。因此，我们尝试使用媒介使用蛋白质表达系统，该载体在未观察到作为重组大肠杆菌蛋白的表达时被认为有效，并且是表达宿主的大肠杆菌菌株，但并未以相同的方式观察到蛋白质表达。人们认为分枝杆菌蛋白的靶标需要重组蛋白表达系统。将来，我们将试图克隆分枝杆菌重组蛋白表达载体并进行分析。