GATA1ノックダウン・マウスにおける造血障害の遺伝子解析と遺伝子治療

GATA1敲除小鼠造血障碍的遗传分析和基因治疗

• 批准号: 11770394
• 负责人: 北澤 淳一
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770394/
• 关键词: GATA-1; NF-E2; ノックダウン・マウス; MDS

1.GATA-1遺伝子が不活化された造血細胞がどのような機序で生体内で増殖優位性を獲得するかを明らかにするために、GATA-1ノックダウン・マウス(GATA-1.05)のヘテロの雌を長期に飼育し経過観察した。脾は、GATA-1.05)のヘテロの雌では、ほとんど例外なく腫大し、赤血球系と巨核球系の細胞の増加が認められた。まず、脾細胞から単核球を単離し、トロンボポイエチン(TPO)を加えた液体培地で巨核球系細胞を培養した。次に、ノーザン法で増殖している巨核球系細胞におけるGATA-1の発現がコントロールに比較して低下していることを確認した。トロンボポイエチン(TPO)、エリスロポイエチン(EPO),IL-6,IL-3,ステムセルファクター(SCF)などを様々な組み合わせで添加し、液体培養系で長期培養を行った。しかし、結果的に細胞株を樹立することはできなかった。2.そこで細胞株が樹立されるまでの間、筑波大学TARAセンターで樹立されたGATA-3でレスキューされたGATA-1ノックダウン・マウスの脾臓細胞から樹立された細胞株452S/Eの解析を行うことにした。452S/E細胞は、EPOとSCFがその増殖には不可欠であるが、その他の増殖因子に置き換えることができるかを検討した。その結果、EPOをトロンボポイエチン(TPO)に換えても増殖がおこることが明らかとなった。3.GATA-1ノックダウン・マウスの巨核球系細胞では、赤血球・巨核球系転写因子NF-E2の大サブユニットp45の発現が低下していることを見い出した。p45遺伝子のプロモーターを約5kb含むルシフェラーセのレポーター・コンストラクトを作成し、トランスジェニックマウス(F0)を作成した。しかし、この領域には、in vivoで発現するのに必要な配列が含まれていないことが明らかとなった。

1. The GATA-1 gene is not activated and the hematopoietic cells are inactivated, and the sequence of the hematopoietic cells is increased and the reproductive advantage is obtained in vivo.るために、GATA-1ノックダウン・マウス(GATA-1.05)のヘテロのfemaleをLong-term breeding and breeding. Spleen は, GATA-1.05) のヘテロの女では, ほとんど Exception なく swollen し, erythrocyte system and megakaryocyte system のincrease plus が cognition められた.まず, splenocyte から単単ucleosphere を単isoし, トロンボポイエチン (TPO) をadded えた liquid culture medium and megakaryocyte lineage cells を culture した.に、ノーザン Method で Propagation している Megakaryocyte lineage cells におけるGATA- 1の発成がコントロールにComparisonしてlowerしていることをconfirmationした.トロンボポイエチン(TPO), EPO,IL-6,IL-3,ステムセルファクター (SCF) などを様々な group み合せでadded, liquid culture system でlong-term culture を行った.しかし、The resulting に cell line was established by することはできなかった. 2. The cell line was established at the University of Tsukuba, and the University of Tsukuba established the TARA cell line at the GATA-3 facility.れたGATA-1ノックダウン・マウスの spleen cells からEstablishment of された cell line 452S/E を行うことにした. 452S/E cell は, EPO と SCF が そ し に は can not owe で あ る が, そ の の proliferation factor に SET き change え る こ と が で き る を 検 ask し た.そのRESULTS, EPOをトロンボポイエチン(TPO)にchangeえても嗗综合がおこることが明らかとなった. 3.GATA-1ノックダウン・マウスのMegakaryoblast cell line, erythroblast, megakaryocyte cell line Write the factor NF-E2の大サブユニットp45の発成が下下していることを见い出した. p45 Remaining 伝子のプロモーターを About 5kb contains むルシフェラーセのレポーター・コンストラクトを成し、トランスジェニックマウス(F0)を成した.しかし, この区には, in vivo で発appears するのにNecessary arrangement がcontaining まれていないことが明らかとなった.

项目成果

Terui K,Kitazawa J, et al.: "Dynamics of lineage-specific transcription factor expressionduring megakaryocytic differentiation."Tohoku J Exp Med. (in press).

Terui K、Kitazawa J 等人：“巨核细胞分化过程中谱系特异性转录因子表达的动态。”Tohoku J Exp Med。