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シュードタイプ・バキュウロウイルスベクターを用いたSly病マウスの遺伝子治療

使用假型杆状病毒载体对 Sly 病小鼠进行基因治疗

基本信息

批准号：
11770429
负责人：
小林博司
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

Sly病の遺伝子治療を目的とした新しい遺伝子導入法として、今回バキュロウイルスを用いた系を検討した。更にin vivoでの神経細胞への遺伝子導入の前段階としてラット神経系初代培養細胞への遺伝子導入をpseudotypeを用いて検討した。方法としてはまず、Sly病の欠損酵素であるβ-glucuronidase発現遺伝子(HBG)を挿入した組替えバキュロウイルスをヒト肝細胞癌セルラインであるHepG2に感染させその導入効率を検討した。またLacZ,VSVG(水泡性口内炎ウイルス糖蛋白発現遺伝子)を組み込んだpseudotype baculovirusをRat primary mixed glial cultureに3日間感染させたあとβ-galおよびGFAPの二重染色を施行。Double positive cellを検討することによりアストロサイトへの導入を検討した。結果はCAGプロモーターを持つ発現ベクターを用いてHepG2に感染させた場合mock41nmol/mg/hrに対し223-1397nmol/mg/hrと高い導入効率を得た。またpseudotype baculovirusをRat primary mixed glial cultureに感染させた結果、全アストロサイト(n=500)のうち4.7%にlacZの導入が確認された。今回バキュロウイルスを用いた系として初めて神経系初代培養細胞への遺伝子導入に成功した。その機序としてpseudotypeにすることにより宿主細胞内での小胞体などへの取り込み率が低下するため導入効率が上昇すると考えられた。これはバキュロウイルスを用いた系におけるin vivoでの神経系細胞への遺伝子導入の可能性を示唆する結果であり、今後HBGを組み込んだpseudotype baculovirus等を用いて更なる検討を続ける予定である。

The purpose of Sly disease gene therapy is to introduce a new gene therapy system. In addition, the gene introduction of primary cultured cells in vivo was studied by pseudotype. Methods: To investigate the rate of introduction of HepG2 into hepatocellular carcinoma cells by using β-glucuronidase gene (HBG) as an alternative to hepatocellular carcinoma cells. LacZ, VSVG (vesicular endostomatitis) was grouped into pseudotype baculovirus and Rat primary mixed glial culture, and double staining was performed for 3 day infections. Double positive cell search results The results showed that CAG was able to maintain high efficiency of HepG2 in the presence of mock 41 nmol/mg/hr and 223 - 1397 nmol/mg/hr. The results of infection with pseudotype baculovirus in Rat primary mixed glial culture were confirmed by 4.7% of lacZ imports from all species (n = 500). The gene transfer of primary cultured cells of the nervous system was successfully carried out. The mechanism of this disease is to reduce the rate of microcellular infection in host cells. The results of this study indicate the possibility of gene introduction in vivo into human neurocytic cells, and future studies on the use of HBG in human pseudotype baculovirus are expected.