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シュードタイプ・バキュウロウイルスベクターを用いたSly病マウスの遺伝子治療

使用假型杆状病毒载体对 Sly 病小鼠进行基因治疗

基本信息

批准号：
13770411
负责人：
小林博司
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

Sly病の遺伝子治療目的でバキュロウイルスシステムを用いて肝細胞株、ラット神経系初代培養細胞、およびマウス脳内直接投与により検討した。方法としてはまずSly病の欠損酵素であるhuman β-glucuronidase発現遺伝子(HBG)を挿入した組替えバキュロウイルスを2種類(CAG promoterおよびpseudotype)作成しヒト肝癌細胞株であるHepG2に遺伝子導入し発現を検討。更にLacZを組み込んだ組替えウイルスをラット神経系初代培養細胞に3日間感染させた後β-gal,GFAPの二重染色を施行しDouble positive cellを検討することによりastrocyte,oligodendrocyteへの導入を検討した。同様に作成した組替えバキュロウイルスを正常およびSly病モデルマウスに定位脳手術装置を用いて直接脳内注射しin vivoにおける遺伝子導入を検討した。結果はCAG promoterの発現ベクターではHep G2においてmockの5.4倍から34.0倍のHBG活性が得られ、pseudotypeでも7.0倍から8.3倍の活性が得られた。ラット神経細胞への導入(in vitro)ではCAG promoterで4.7%のastrocyteにlacZの導入が可能であり、pseudotypeを用いる事によってastrocyte 10.4%、更にoligodendrocyte35.6%に導入が見られ、飛躍的な導入効率の上昇が見られている。またpseudotype virusではマウスの脳内直接注射によってもLacZの発現が脳室周囲および実質内に確認されている。ただLacZの代わりにHBGに組替えたウイルスでSly病モデルマウスに直接脳内投与した実験ではin vivoで十分な発現が活性染色で確認できず、更に検討中である。

Sly disease gene therapy is aimed at using liver cell lines, primary culture cells, and direct injection into the system. Methods To investigate the expression of human β-glucuronidase promoter (HBG) in HepG2 cells, two CAG promoter types were used to construct the HBG promoter. In addition, LacZ group was divided into three groups: primary cultured cells, primary cultured cells, and primary cultured cells. After 3 days of infection, double staining of β-gal,GFAP was performed. Double positive cells were examined. In the same way, the surgical device is used for direct injection into vivo. The results showed that CAG promoter activity was 5.4-fold to 34.0-fold higher than that of Hep G2, pseudotype was 7.0-fold to 8.3-fold higher than that of Hep G2. In vitro, CAG promoter was 4.7% of astrocyte and lacZ was introduced. Pseudotype was 10.4% of astrocyte and oligodendrocyte was 35.6% of oligodendrocyte. The pseudotype virus was detected by direct injection into the tissue. Hbg is composed of two parts: one part is in vivo, the other part is in vivo.