臓器移植における免疫抑制剤投与の新しい制御基準の開発

器官移植免疫抑制剂管理新控制标准的制定

• 批准号: 11770661
• 负责人: 岩田 尚
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770661/
• 关键词: calcinuerin; RII peptide; リン酸化Serine; ELISA; Phospho-serine

calcinuerinの酵素活性測定システムの確立のためcalcinuerinに対する基質としてのRII peptide Biotin-Asp-Leu-Asp-Val-Pro-Ile-Pro-Gly-Arg-Phe-Asp-Arg-Arg-Val-Ser-Val-Ala-Ala-Glu-COOHをpeptide合成機を用いて作製した。peptide構造のSer残基をリン酸化したpeptideとcontrolとしてのリン酸化していないpeptideを作成した。このpeptideをstreptaviginコーティングプレートに固定した。calcinuerinが合成RII peptideのリン酸化serine残基を脱リン酸化し、その後残存したリン酸化serineを抗リン酸化serine抗体を用いて検出する系をデザインした。リン酸化Serineを特異的に認識する抗体を5種類について検討した(4種類がmonoclonalそして1種類がpolyclonal抗体)。結果、monoclonal抗体のみならずpolyclonal抗体もRII peptideコーティングプレートに対して認識されなかった。抗体が実際に認識できないのか否かを確認するためにRII peptideをニトロセルロース膜にブロットし各種抗体を反応させたが測定感度以下であった。以上の結果より、RII peptide内のリン酸化Serine残基周囲の立体構造に特異的に反応する抗体が準備できなかったために、測定システムの確立が困難と考えられた。今後作成したRII peptideによる抗体の作成をすすめる予定である。

The enzyme activity of calcinuerin was determined and the substrate for calcinuerin was prepared by RII peptide Biotin-Asp-Leu-Asp-Val-Pro-Ile-Pro-Gly-Arg-Phe-Asp-Arg-Arg-Val-Ser-Val-Ala-Ala-Glu-COOH peptide synthesizer. Ser residues of peptide structure are acidified and peptide control is performed. The peptide is streptavigin. Calcinuerin is used to synthesize RII peptide and to purify serine residues. 5 types of antibodies (4 types of monoclonal antibodies and 1 type of polyclonal antibodies) Results: Monoclonal antibody and polyclonal antibody RII peptide were identified. The sensitivity of the antibody is determined by the detection of the antibody. The above results show that it is difficult to prepare and determine the specific structure of Serine residues in RII peptide. To create a peptide