婦人科癌における遺伝子腫瘍マーカーの確立

妇科肿瘤基因肿瘤标志物的建立

• 批准号: 11770964
• 负责人: 高野 浩邦
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770964/
• 关键词: cytokeratin 19; gene expression; ovarian cancer; CK19; RT-PCR; hTERT; PIK3CA

現在までに、癌患者の末梢血中には癌細胞が流入し、体内を循環していることが分かってきた。更に分子生物学的手法の進歩により極微量の検体から、目的の遺伝子の発現を検出することが可能となり、最近肺癌患者の末梢血から通常では検出されないサイトケラチン19の発現が検出された。この結果は末梢血を採血するだけで、肺癌の細胞で発現している遺伝子の検出が可能であったことを示しており、肺癌に限らず他の癌や他の遺伝子の発現についても同様の手法を用いることが可能と考えられる。我々は、術前の良悪性の診断や術後の再発の早期発見が難しい卵巣癌に注目しこの方法を応用することを計画した。7つの卵巣癌cell lineおよび末梢血よりguanidinium thiocyanate-phenol-chloroform法にてRNAを抽出しμMASC mRNA Isolation KitにてmRNAとし、それらをもとにcDNAを作成した。そのcDNAをテンプレートとしてnested-PCR法にてCK19の発現を検索した。結果は、検索した7つの卵巣癌cell lineすべてで陽性であった。臨床検体については健常人20人中12人(60%)、良性腫瘍患者14人中10人(71%)、悪性腫瘍患者25人中21人(84%)が陽性となった。健常人に比べて腫瘍を有する患者、特に悪性腫瘍の患者の末梢血中では高頻度にCK19が発現していた。しかし健常人、良性腫瘍患者、悪性腫瘍患者の陽性率の間に統計学的に有意な差は認められなかった。原因の一つは、正常顆粒球でも極微量不規則に発現しているCK19を検出している可能性が考えられる。感度は高いが特異性の低さが問題として残った。最近他の癌についても、この方法の特異性の低さを指摘する報告がなされており、特異性を向上させるための改良、さらには特異性の高い他のターゲットの検索が今後の課題となる。

Cancer cells flow into the peripheral blood of cancer patients and circulate in the body. In addition, advances in molecular biology have led to the discovery of small amounts of DNA and target genes. Recently, peripheral blood samples from lung cancer patients have often been detected. The results include peripheral blood sampling, lung cancer cell development, possible gene detection, lung cancer cell limitation, and other cancer cell development. We plan to use this method for the diagnosis of ovarian cancer before surgery and early detection of postoperative recurrence. 7. RNA Isolation Kit for DNA Generation from Human Ovarian Cancer Cell Line and Peripheral Blood by Guanidinium Thiocyanate-phenol-chloroform The expression of CK19 was detected by nested-PCR The results showed that there was no positive correlation between the cell line and the tumor size. 12 (60%) out of 20 healthy individuals, 10 (71%) out of 14 benign ulcers and 21 (84%) out of 25 sexual ulcers were positive in clinical examination. CK19 was found more frequently in peripheral blood of healthy individuals than in patients with specific tumors. The positive rates of healthy individuals, benign tumor patients and benign tumor patients were statistically different. The reason is that the irregular amount of dust in normal granulocytes occurs in CK19, and the possibility of detection is examined. Sensitivity is high and specificity is low. Recent reports on the low specificity of this method suggest that it may be a problem for the future.

项目成果

Hirokuni Takano: "Low Specificity of Cytokeratin 19 mRNA Expression in the Peripheral Blood Cells from Patients with Ovarian Tumors."Oncology Reports. 7(5). 1023-1025 (2000)

Hirokuni Takano：“卵巢肿瘤患者外周血细胞中细胞角蛋白 19 mRNA 表达的低特异性。”肿瘤学报告。