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エナメル質形成におけるCD44を介した細胞内情報伝達機構の解析

CD44介导的釉质形成细胞内信号转导机制分析

基本信息

批准号：
11771110
负责人：
中村浩彰
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

エナメル器を構成するエナメル芽細胞、エナメル髄、中間層細胞、外エナメル上皮の分化に関連してCD44が発現することが形態学的に明らかになった。しかしながら、市販の抗CD44抗体はWestern Blotting、免疫沈降には適さず、本年度はラットCD44のアミノ酸配列から細胞質ドメインのペプチドをウサギに免疫しに抗血清を得た。さらに同ペプチドを用いてアフィイニテイーカラムを作製し、抗CD44ペプチド抗体を精製した。本抗体は免疫染色、Western Blottingに有用であるとともに免疫沈降法にも適用でき、ラット下顎切歯からの抽出タンパクを用いて免疫沈降を行ったところ分子量80-85kDのCD44を得ることができた。このCD44タンパクを用いてグリコサミノグリカンについてWestern Blottingにより検索したが、コンドロイチン4硫酸、6硫酸、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸に対する抗体には反応が認められず、付加される糖鎖については不明のままである。従来、CD44とERMファミリーの結合が報告されているが、今回の共沈タンパクの中にエズリンは存在せず、逆にエズリン抗体を用いた免疫沈降によってもCD44との結合は確認できなかった。一方、NP40に不可溶性分画には50kDの抗CD44ペプチド抗体陽性バンドを認められ、同分画にエズリンも存在することがわかった。近年、CD44が細胞外領域で切断され、細胞運動、機能発現に重要な役割を果たしていることが報告されていることから、エズリンなどの細胞内骨格と結合したCD44分子が不溶性になっている可能性が示唆された。

The ectopic organ is composed of ectopic bud cells, ectopic cells, middle layer cells, and ectopic cells. Epithelial differentiation is related to the appearance of CD44 and its morphology.しかしながら, commercially available anti-CD44 antibody, Western Blotting, immunosedimentation, and this year's CD44 Noacid ligation and cytoplasmic antiserum are available.さらに Same as ペプチドを is made with いてアフィイニテイーカラムを, and anti-CD44 ペプチド antibody is refined. This antibody is used for immunostaining and Western Blotting is useful and immunosedimentation method is applicable, and it is suitable for mandibular cutting and extraction.ンパクを Used いて immunoprecipitation を line ったところのCD44 with a molecular weight of 80-85kD to get ることができた. Western CD44 Blotting により検SO したが, コンドロイチン4 sulfuric acid, 6 sulfuric acid, ケラタン sulfuric acid, ヘパThe ランsulfate に対するantibody にはanti-recognitionめられず, the added されるsugar lock についてはunknown のままである.哓来、CD44とERMファミリーの合がreportされているが、本片　　　　タンパクの中にエズリンThe presence of せず and reverse にエズリン antibodies was confirmed by いたimmunoprecipitation and によってもCD44 and binding. On the one hand, NP40 is an insoluble type of anti-CD44 50kD anti-CD44 antibody positive, and the same type of anti-CD44 antibody is present. In recent years, CD44 has become important in cutting off the extracellular domain, cell movement, and functional development.いることから, エズリンなどの intracellular bone structure と binding した CD44 molecule が insoluble になっている possibility が indicative された.