歯周病原性菌の鉄獲得を制御するレプレッサー蛋白の遺伝子クローニングと機能解析

控制牙周病原菌获取铁的阻遏蛋白的基因克隆和功能分析

基本信息

批准号：
11771154
负责人：
久保庭雅恵
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,Porphyromonas gingivalis(P.g)のもつ鉄獲得システムの発現調節機構を解明する目的で,まず,Escherichia coliのFerric uptake regulator protein(Fur)をコードする遺伝子(fur)と相同性の高い遺伝子配列がP.gゲノム上に存在するかどうかをサザンハイブリダイゼーション法を用いて調べた.その結果,E.coliのfurと弱く反応するバンドが1カ所のみ検出された.そこで,反応バンドの切り出し精製によってミニライブラリを作成し,Bacillus subtilisを宿主細菌として用いたコロニーハイブリダイゼーション法により,ミニライブラリ中のP.g遺伝子断片のスクリーニングをおこなった.ハイブリダイゼーションの反応性の弱さからE.coliのfurとP.gのfur様遺伝子はかなり相同性が低いことが予測され,クローニングは技術的困難を伴い成功しなかった.また,現在P.gの全ゲノム塩基配列の解読が進められているが,現時点で解読が終了し公表されている塩基配列中において,E.coliのfurとの相同性検索で検出される配列は認められなかった.我々はこれまでにP.gが産生するリジン特異的システインプロテアーゼ(KGP)がヘモグロビン結合能を有し,P.gの鉄獲得機構において重要な役割を果たしていることを明らかにしてきた.そこで同分子に対するDNAワクチンを作製し,P.g感染に対する防御効果をマウスを用いて評価したところ,明確な感染防御効果が認められた.このことから,KGPがP.gの病原性発揮という側面においても重要な役割を果たしていることが明らかとなった.

在这项研究中，为了阐明牙龈卟啉单胞菌（P.G）的铁采集系统的表达调节机制，我们首先研究了在P.G Genome上发现了与Escherichia coli的基因同源性（Fur）具有高度同源性的基因（Fur）。结果，仅检测到一个与大肠杆菌毛皮反应弱的条带。因此，通过切除和净化反应带创建了一个小型图，并使用芽孢杆菌创建芽孢杆菌。使用枯草菌作为宿主细菌的菌落杂交方法用于筛查迷你纤维中的P.G基因片段。由于杂交的反应性较弱，可以预测，大肠杆菌和毛皮样基因的皮毛明显较少同源，并且由于技术困难而无法成功。此外，目前正在解密的P.G的整个基因组核苷酸序列，但是解密现已完成，并且已发布核苷酸序列已完成，并与大肠杆菌的皮毛一起进行了同源测试。在链接中未发现序列。我们先前曾透露，P.G产生的赖氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（KGP）具有结合血红蛋白并在P.G的铁习得机制中起重要作用。因此，我们针对该分子创建了一种DNA疫苗，并评估了使用小鼠针对P.G感染的保护作用，并发现了明显的感染保护作用。这表明KGP在发挥P.G.的致病性方面也起着重要作用。