舌動脈血管反応性に対する活性酸素ラジカル種の作用様式と弁別評価

活性氧自由基对舌动脉血管反应性的作用方式及鉴别评价

• 批准号: 11771151
• 负责人: 吉野 文彦
• 金额: $ 0.32万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771151/
• 关键词: フリーラジカル; 血管平滑筋; 一重項酸素; 電子磁気共鳴(ESR); ノルアドレナリン; (1)フリーラジカル; (2)血管平滑筋; (3)一重項酸素; (4)電子磁気共鳴(ESR); (5)ノルアドレナリン

血管反応性に対し,活性酸素種の種特異的作用様式が存在するか否か詳細に解析することを標記研究課題の最終目標とする。昨年度は神経伝達物質であるノルアドレナリン(NA)及び血管平滑筋張力を測定することにより,活性酸素種の作用を整理するための基礎実験を行った。本年度はその基礎実験を基盤として詳細な作用様式を検討するための実験に着手した。従って,シナプス前作用(α受容体に対する作用)に対して一重項酸素(^1O_2)がどのような特異的修飾作用を示すか解析することを目的の基本とした。ニュージーランド白色家兎から摘出した血管螺旋状標本を作成した。表面灌流装置内のバスに標本を懸垂し,O_2,CO_2混合ガスにより通気したKrebs-Ringer溶液を表面灌流させ,安定期間後に測定を開始し,10分間の^1O_2曝露・10分間の電気刺激,10分間の回復期間とする実験設定で計30分間連続してNAサンプリングと血管張力の測定を行った。また,α受容体の遮断薬であるPrazosin(10^<-6>M)を^1O_2曝露と同時に表面灌流し,電気刺激を開始するまで計10分間処置した。血管張力変化は張力トランスデューサーを介して,内因性NA放出量は,表面灌流液を回収しその後前処理を経てHPLCにより定量した。^1O_2の発生は光増感試薬Rose bengal(50μM)に波長550nm,照度18,000 luxの緑色光を照射し行った。^1O_2の発生量は電子磁気共鳴(ESR)法を用い,2,2,6,6-tetramethylpiperidine(TEMP)が^1O_2と反応して生じる2,2,6,6-tetramethlpiperdine-N-oxyl(TEMPO)のシグナルを指標として測定した。はじめに,用いた実験系において^1O_2が発生しているかどうかをESR法により確認した。ESR法ではRose bengal+光照射で^1O_2の発生を示す3本線のTEMPOラジカルの信号が確認され,^1O_2の消去剤として知られるL-histidine(50mM)の添加によりその信号強度は有意に減弱した。Rose bengal存在下における光照射により血管標本の静止張力およびNA放出量の増加が認められ,これらはL-histidine(50mM)の処置によりほぼ完全に消失した。次に,^1O_2が静止張力を増加させているのか,若しくは^1O_2によって放出されるNAが静止張力を増加させているのかを区別するため,α1受容体遮断薬であるPrazosin(10^<-6>M)を処置することにより検討した。^1O_2処置では,静止張力およびNA放出量はともに増加し,Prazosin処置によりその張力の増加のみが抑制された。このことにより,^1O_2曝露により放出されたNAが張力の増加を起こしていることが確認された。本研究で得られた結果より^1O_2は,静止状態での張力及びNA放出量を増加させたが,静止張力の増加はα1受容体遮断薬の処置により抑制されたことから,^1O_2はシナプス前膜に直接作用し,シナプス前膜を障害あるいはシナプス前膜性α2受容体機能を抑制し,NA放出量を増加させ,この増加したNAが血管標本の静止張力を増加させたことが示唆された。

The ultimate goal of this study is to analyze the existence of species-specific mechanisms for vascular response. In the past year, the role of active acid species in the determination of vascular smooth muscle tension was studied. This year, we will start to discuss the basic principles and detailed functions of the project. The basic purpose of this analysis is to show the specific modification effect of a compound (^1O_2). The white house is cut off and the blood vessel spiral is made. In the surface perfusion apparatus, the concentration of oxygen and carbon dioxide in the mixture was measured by Krebs-Ringer solution. After the stabilization period, the measurement was started. After 10 minutes of O2 exposure, 10 minutes of electrical stimulation, 10 minutes of recovery period, the measurement was set to 30 minutes. Prazosin(10^ M) was used to block the α-<-6>receptor and to treat it within 10 minutes after the initiation of electrical stimulation. Vascular tension changes due to stress, intrinsic NA release, surface perfusion and pretreatment by HPLC 1O_2-induced photosensitizing agent Rose bengal(50μM) was irradiated with green light at wavelength of 550nm and illumination of 18,000 lux. The emission of 1O_2 was determined by electron magnetic resonance (ESR) method. The emission of 2,2,6,6-tetramethylpiperidine(TEMP) was determined by electron magnetic resonance (ESR) method. The ESR method was used to confirm the occurrence of the disease. ESR method shows the emission of ^1O_2 under Rose bengal+ light irradiation. The TEMPO signal of this line is confirmed. The signal intensity of ^1O_2 elimination and L-histidine(50mM) addition is intentionally weakened. In the presence of Rose bengal, light irradiation caused an increase in resting tension of vascular tissue and NA release, but the treatment with L-histidine(50mM) completely disappeared. In addition, if the static tension of ^1O_2 is increased, the static tension of NA is increased, and the difference between α1 receptor and Prazosin(10^<-6>M) is discussed. 1O_2 treatment, static tension and NA emission increase,Prazosin treatment, tension increase and inhibition. This is the first time I've ever seen a woman who's been exposed to radiation. In this study, the results showed that the static tension and NA emission increased, and the static tension increased, and the α1 receptor barrier function was inhibited. The increase in the static tension of the vascular system

项目成果

萩原鉄也: "血管平滑アドレナリン作動性神経伝達に対するヒドロキシルラジカル(HO^・)の効果(第2法)"磁気共鳴と医学. 11. 17-20 (2000)

Tetsuya Hagiwara：“羟基自由基（HO^·）对血管平滑肾上腺素神经传递的影响（方法2）”磁共振与医学。11. 17-20（2000）

萩原鉄也: "血管平滑筋アドレナリン作動性神経伝達に対するヒドロキシルラジカル(HO)の効果(第2報)"磁気共鳴と医学. 11(印刷中). (2000)

Tetsuya Hagiwara：“羟基自由基 (H2O) 对血管平滑肌肾上腺素能神经传递的影响（第二次报告）”《磁共振与医学》（2000 年出版）。