初代培養骨芽細胞における副甲状腺ホルモンのコラゲナーゼ遺伝子発現機序

原代培养成骨细胞中甲状旁腺激素胶原酶基因表达机制

• 批准号: 11771165
• 负责人: 松沼 礼子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Ohu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771165/
• 关键词: 副甲状腺ホルモン(PTH); 初代培養骨芽細胞; MMP-1; ODF; OCIF; OPG

副甲状腺ホルモン(PTH)は、骨芽細胞に作用して、コラーゲン分解酵素や破骨細胞活性化因子であるODF(osteoclast differentiation factor)の発現を誘導することで、骨吸収を促進させるカルシウム代謝調節ホルモンである。本研究では、transformした骨芽細胞株(UMR106など)に比べ、よりin vivoの条件に近い初代培養骨芽細胞を用いて、PTHの骨吸収作用機構の解明を試みた。まず、初代培養骨芽細胞を得るために、摘出した新生児ラットの頭蓋冠にcollagenase-trypsinを段階的に作用させるたところ、3〜5回作用させた分画で生理的に活性なPTH受容体のレベルが高かったので、この分画を以降の実験に用いることにした。ラットのMMP-1、MMP-13、ODFおよびOPG(osteoprotegerin)のcDNAプローブを作製し、以下の解析に用いた。初代培養骨芽細胞系にPTHを作用させた場合の、コラゲナーゼの発現をノーザンブロット法で解析したところ、MMP-1,-13いずれにおいてもその発現の上昇が見られた。また、PTHによるODFのmRNA発現は、処理後1時間で発現が上昇し、その後24時間までそのレベルは維持された。OCIF/OPGは、PTH処理により3時間後に発現がピークとなったが、その後漸減した。PTHによるMMP-1、ODFの上昇作用はいずれも細胞内cAMPレベルを上昇させるフォルスコリンで代用され、ODFに関してはH89で阻止されたことからプロテインキナーゼA(PKA)経路の関与が示唆された。しかし、MMP-1の上昇はH89では阻止されず、PKA経路とは別の経路が関与することが予想された。

Parathyroid ホ モ モ <e:1> (PTH), osteoblast に action <s:1> て, コラ ゲ ゲ ゲ <s:1> <s:1> enzyme for decomposing や osteoclast activating factor であるODF(osteoclast differentiation) Factor) の 発 now を induced す る こ と で, bone absorption 収 を promote さ せ る カ ル シ ウ ム metabolic regulation ホ ル モ ン で あ る. This study で は, transform し た bone bud cell line (UMR106 な ど) に than べ, よ り in vivo の conditions に nearly を culture bone bud cells with い い early generation て, PTH の bone absorption 収 role institutions の interpret を try み た. ま ず, early generation grow bone bud cells を る た め に, pick the し た where new ラ ッ ト の epicranium crown に collagenase - trypsin を Duan Jie に role さ せ る た と こ ろ, 3 ~ 5 back さ せ た points draw で physiological activity に な PTH by let body の レ ベ ル が high か っ た の で, こ の painting を to drop の be 験 に with い る こ と Youdaoplaceholder0 た. ラ ッ ト の MMP 1, MMP - 13, ODF お よ び OPG (osteoprotegerin) の cDNA プ ロ ー ブ を for し preparation, the following analytical に の い た. Original culture bone bud cell line に PTH を role さ せ た の, コ ラ ゲ ナ ー ゼ の 発 now を ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト method で し た と こ ろ, MMP 1, 13 い ず れ に お い て も そ の 発 rise is の が see ら れ た. ま た, PTH に よ る ODF の mRNA 発 は, 処 now after 1 time で 発 が rise し, そ の 24 time after ま で そ の レ ベ ル は maintain さ れ た. After the OCIF/OPG によ and PTH treatments for 3 hours, に appeared がピ によ となったが となったが となったが and そ た gradually decreased た. PTH に よ る MMP 1, ODF の rising role は い ず れ も intracellular cAMP レ ベ ル を rise さ せ る フ ォ ル ス コ リ ン で substitute さ れ, ODF に masato し て は H89 で stop さ れ た こ と か ら プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ A road (PKA) 経 の masato and が in stopping さ れ た. <s:1> <s:1>, MMP-1 <s:1> ascends <s:1> H89で stops されず, PKA route と と separate <s:1> route が and する とが とが とが think された.

项目成果

Nagako Akeno: "Regulation of vitamin D-1α-hydroxylase and -24-hydroxylase expression by dexamethasone in mouse kidney."Journal of Endocrinology. 164. 339-348 (2000)

Nagako Akeno：“地塞米松对小鼠肾脏中维生素 D-1α-羟化酶和 -24-羟化酶表达的调节。”内分泌学杂志 164. 339-348 (2000)

Toyonobu Maeda: "Simvastatin promotes osteoblast differentiation and mineralization in MC3T3-E1 cells."Biochemical and Biophysical Research Communications. 280. 874-877 (2001)

Toyonobu Maeda：“辛伐他汀促进 MC3T3-E1 细胞中的成骨细胞分化和矿化。”生物化学和生物物理研究通讯。