簡易型レーザー光散乱測定装置の開発とアルツハイマー病治療薬探索への応用

一种简单的激光光散射测量装置的研制及其在阿尔茨海默病治疗药物寻找中的应用

基本信息

  • 批准号:
    11771410
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.32万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 2000
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

アルツハイマー病の発症は、分子量4Kのアミロイドβ蛋白(Aβ)が脳内で会合して繊維化し、分解または代謝されずに蓄積することが主な原因と考えられている。そこで、本研究では、Aβの繊維化をより簡単に検出するための簡易型レーザー光散乱測定装置を製作し、繊維化の機構とそれを阻害する物質の探索を行なった。以下に本研究で明らかになった知見を記す。1.Aβの繊維化を簡易型レーザー光散乱装置で追跡したところ、0.1M tris-HCl(pH=7.4,35℃)緩衝液中において、60時間後から急激に繊維化が始まることを見出した。2.繊維化が開始される前の緩衝液中のAβ平均分子量は、SDS-PAGE(電気泳動法)により20〜40k Daであることが分かった。すなわち、繊維化の前段階で5〜10個程度の可溶性Aβオリゴマーの形成が確認された。また、Aβ単量体もかなりの割合で残っていることも分かった。3.円二色性スペクトルの結果から、Aβの構造は繊維化が始まるまでの間にランダムコイル構造からβシート構造に変化していることが確認された。つまり、このような構造変化がAβの繊維化の引き金になっていると思われる。4.Aβの構造変化を阻害するといわれている脳内物質メラトニンを用いて、繊維化の阻害がみられるかを簡易型レーザー光散乱測定装置で検討した。しかし、メラトニンがAβの繊維化を阻害するという結論には至らなかった。以上の知見から、Aβの繊維化をより迅速により簡単に観測する手段として、本研究で製作した簡易型レーザー光散乱測定装置の有効性が示された。したがって、本装置はAβの繊維化を阻害する薬物の探索に有効であると考えられる。
The main cause of the disease is the molecular weight of 4K beta protein (Aβ), which converges, decomposes and accumulates in the body. This study aims to explore ways to simplify the detection of Aβ and to develop a simple optical scattering measurement device for A β. The following is a summary of this study. 1. A β is maintained in a simple type of light scattering device. Trace is performed in 0.1M tris-HCl(pH= 7.4, 35 ℃) buffer solution. After 60 hours, rapid excitation is performed. 2. The average molecular weight of Aβ in the buffer solution prior to the start of the polymerization was 20 ~ 40 kDa by SDS-PAGE. The formation of soluble Aβ was confirmed at 5 ~ 10 levels in the early stages of protein and protein maintenance. Aβ is a single substance. 3. Dichromatic structure change result, Aβ structure change start time, A β structure change time. The structure of Aβ and its dimensionality are changed. 4. A simple optical scattering measuring device for the structural change of A β is discussed. Aβ-D is the most important factor in the development of the disease. In view of the above, Aβ can be easily and easily measured. In this study, a simple optical scattering measurement device was developed to demonstrate its effectiveness. This device is designed to prevent damage to the A beta.

项目成果

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