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CaMキナーゼIIリン酸化カスケード下流で発現が増加する可塑性遺伝子の同定

CaM 激酶 II 磷酸化级联下游表达增加的可塑性基因的鉴定

基本信息

批准号：
11780572
负责人：
高松芳樹
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

ディファレンシャルディスプレイの結果、これまでに7個のバンドについて解析を行ったが、ノザンハイブリダイゼーションの段階で発現に差のある新規遺伝子の同定には至っていない。CaMKII欠失変異体のヘテロ接合体成虫脳のキノコ体では、そのアクソン束であるα、βの各葉が著しく細くなっている。一方、2番染色体へのCaMKII遺伝子導入体ではα、βの各葉の、欠失を含む形態異常が観察された。これらのことは、CaMKIIがキノコ体Kenyon細胞のサバイバル及びアクソンの正常な伸展に関与することを示唆する。キノコ体Kenyon細胞特異的に発現する転写因子MEF2は小脳顆粒細胞の活動依存的なサバイバルに必要であることが哺乳類の系で示されている。MEF2抗体を用いてショウジョウバエMEF2発現細胞核と、核移行シグナル付きlacZレポーター遺伝子でdCaMKII-GAL4発現細胞核を共焦点顕微鏡で比較したところ、両者のシグナルは良く一致した。CaMKシグナル下流でMEF2活性が上がることをOlsonらが示しており、MEF2下流に脳高次機能に関わる標的因子が想定できる。さらにMyb類縁の転写因子Adf-1はCaMKIIに直接リン酸化され、変異体での長期記憶障害も報告されている。今後、これらのCaMKII標的候補転写因子の下流探索についてもdCaMKII-GAL4を用いたRNA干渉(RNAi)法により集中的に進める。一方、今年度は免疫組織化学、ウェスタンプロッティングの双方に利用可能なショウジョウバエCaMKII特異抗体の作製に成功した。ショウジョウバエCaMKIIは学習記憶に必要であることが示されているにも関わらず、基礎データとなるその翻訳産物の脳での発現分布の記述が無い。これを明らかにするため、成虫脳の連続パラフィン切片を作製し、脳全域でのCaMKII分布を明らかにした。

The results of the analysis of the seven samples were analyzed, and the differences between the results of the analysis and the new samples were analyzed. CaMKII heterozygote adult body, alpha and beta leaves The CaMKII gene introgression of one or two chromosomes contains morphological abnormalities in α and β leaves. CaMKII is the most common type of cell in the world. The expression of MEF2, a gene specific to human Kenyon cells, is essential for mammalian lineage development. MEF2 antibody was used to detect the expression of MEF2 in the nucleus and nuclear transition. The expression of dCaMKII-GAL4 in the nucleus was compared with that in the nucleus by confocal microscopy. MEF2 activity in the downstream of CaMK is determined by the following factors: Myb-like transcription factor Adf-1 is directly related to CaMKII, and the long-term memory impairment is reported. In the future, CaMKII-GAL 4 will be used to explore the downstream of candidate writing factors for CaMKII targets. One side, this year's immunohistochemistry, the use of both sides of the possible use of CaMKII specific antibody production success The CaMKII has no description of the occurrence and distribution of the essential components of learning and memory. The distribution of CaMKII in the whole region is clear.