CaMキナーゼIIの脳、神経系特異的な発現調節機構の解析

CaM激酶II脑和神经系统特异性表达调控机制分析

• 批准号: 07780712
• 负责人: 高松 芳樹
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780712/
• 关键词: CaMキナーゼII; 神経系特異的遺伝子発現制御; トランスジェニックフライ; LacZ遺伝子; シスエレメント; 転写制御因子; ゲルシフトアッセイ; in situハイブリダイゼーション法

カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII(CaMキナーゼII)の脳、神経系特異的な発現制御メカニズムを明かにすることを目的として、CaMキナーゼII遺伝子の5′上流領域をLacZ遺伝子につないだコンストラクトを導入したトランスジェニックフライを作成し、解析を進めた。これらのトランスジェニックフライでのLacZ遺伝子の発現を胚のホールマウントin situハイブリダイゼーション法によって調べたところ、転写開始点より上流500塩基対でLacZ遺伝子はCaMキナーゼIIの発現パターンを反映した、脳、神経系特異的な発現パターンを示すことを明かにした。このことは、すなわちこの領域にCaMキナーゼIIの組織特異的な発現を制御する、シスエレメントが存在することを意味している。このシスエレメントを同定するために、上流500塩基対を5つの小フラグメントに分割後、それぞれを放射ラベルし、ショウジョウバエ胚から調製した核抽出液を用いてゲルシフトアッセイを行った。その結果、このうち1つのフラグメントについて強いシフトバンドが認められたことから、この小フラグメント内に組織特異的な転写制御因子の結合する認識配列が存在するものと考えられた。さらに、競合実験の結果、この核内因子の結合は配列特異的であること確識した。このことから、この小フラグメントに特異的に結合する核内因子が存在することを明かにした。これまでの個体レベルでの発現解析およびゲルシフトアッセイの結果、CaMキナーゼIIの神経特異的な発現に必要な領域をしぼりこむことができた。今後、培養細胞を用いたルシフェラーゼアッセイを併用することにより、CaMキナーゼII転写に必須最小のエレメントを1塩基レベルで明かにし、このエレメントを用いてCaMキナーゼIIの組織特異的な転写制御因子の同定に取り組みたいと考えている。

This is not true because of the dependence on the II (CaM information system II) system. The system is designed to provide information on the purpose of the system, the CaM system, the II system, and the high-level LacZ sub-system. The system is designed to improve the performance of the system and analyze the data. This is the most important thing in the world. You need to know that you need to know that you are in the LacZ system. You need to know how to do it. You know, you know In the field of CaM, the organization of the II organization is responsible for the system and the existence of information. This is the same as that in the upper stream of 500 μ g