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トレニアin vitro重複受精系を用いた2つの精細胞の動態解析

利用Torenia体外双受精系统对两个精子细胞进行动态分析

基本信息

批准号：
12740453
负责人：
東山哲也
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度までに、花粉管の先端が胚嚢内部の適切な位置で破裂して内容物を放出し始めると(初速12,000μm3/s)、片側の助細胞が平均わずか0.6sで崩壊して花粉管内容物を受け取るようすを明らかにしてきた(Higashiyama et al. 2000 Plant Physiol.)。そこでさらに、精細胞を核酸染色色素SYTOX Greenによって生体染色し、その動態を明らかにすることを目的とした。受精過程の観察は、胚嚢が観察のための励起光で予想以上にダメージを受けやすく、困難を極めているが、高感度ICCDカメラを導入し、これまでの冷却カラーCCDカメラよりもさらに高感度で観察できるようになった。蛍光を肉眼では見えないほどまで絞込んだ状態で、花粉管内部における精細胞核および花粉管核、さらにはその内部における染色体や核小体の挙動までも、100倍対物レンズで連続的に観察できるようになった。そして、胚嚢内部に放出された2つの精細胞が、花粉管内部での挙動とは異なり、それぞれ離れて独立に動く様子が明確になってきた。また、受精の瞬間の様子を明らかにするには、どの胚嚢で受精が起こるか推測することが重要であったが、これまで明確ではなかった。そこで培地の改変により受精率を向上させるとともに、花粉管を誘引する細胞をレーザー細胞除去により同定し、卵細胞のわきにある2つの助細胞が花粉管を誘引することを解明した(Higashiyama et al. 2001)。確実に受精が起こる胚嚢を予測できるようになり、現在、受精の瞬間の様子について明らかにすべく、さらに解析を続けている。また、当初の計画に基づき、GFPによる生殖細胞の観察やトランジェントアッセイを行うため、アグロバクテリウムによるin planta形質転換の試みを開始した。

Last year's results, the tip of the pollen tube, the appropriate position inside the embryo, the rupture, and the release of the contents (initial velocity 12,000 μm3/s), The average level of synergistic cells on the side of the lamellae is 0.6 seconds, and the content of the pollen tube is pollen tube content. et al. 2000 Plant Physiol.).そこでさらに, sperm cell を nucleic acid staining pigment SYTOX Green によってbiostaining し, そのdynamic を明らかにすることをpurpose とした. The process of fertilization, the fertilization process, the embryo, the light, the light, the feeling above, the difficulty, the feeling of high Degree ICCD カメラを imported し, これまでの cooling カラーCCD カメラよりもさらにhigh sensitivity で看できるようになった. The naked eye can see the state of the pollen tube, the sperm cell nucleus, the pollen tube nucleus, and the inside of the pollen tube.その内におけるChromosome やnucleosome の挙动までも, 100 times対物レンズで连続的に観看できるようになった.そして, された2つのsperm cells released from inside the embryo cyst, での from inside the pollen tube动とはdifferentなり、それぞれ出れて independentに动く様子がclearになってきた.また, the moment of fertilization, the moment of fertilization, the moment of fertilization, the moment of fertilization, the moment of fertilizationこるかguess, することがimportant, であったが, これまでclarify, ではなかった. Fertilization rate of fertilization, pollen tube induction, pollen tube induction, cell removal, fertilization rate improvement Higashiyama et al. 2001). It is confirmed that the fertilization has started, the embryo has been fertilized, the prediction has been made, now, the fertilization has occurred Instant の様子について明らかにすべく、さらにanalytic を続けている.また, original plan に记づき, GFP によるgerm cell の観看やトランジェントアッセイを行うため、アグロバクテリウムによるin The planta shape and substance change the test and the test begins.