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貝による麻ひ性貝毒原因毒の蓄積・排出と毒結合タンパクの関係に関する組織学的検討

麻痹性贝类毒素与贝类毒素结合蛋白积累与排泄关系的组织学研究

基本信息

批准号：
12760132
负责人：
小池一彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760132/
关键词：
麻ひ性貝毒 PSP ホタテガイ毒結合タンパク免疫組織染色

项目摘要

大船渡湾の定点に垂下したホタテガイの中腸腺をアルデヒドで固定し、エタノール脱水、アクリル樹脂包埋後薄切切片を作製し、佐藤らが開発したサキシトキシン(STX)に対するウサギ抗体を反応させ、抗ウサギIgGヤギ抗体-金コロイド、銀増感をへて、PSPを可視化した。その結果、有毒渦鞭毛藻Alexandrium tamarenseで毒化した2000年6月12日と2001年6月11日の試料において、中腸腺毛嚢の酵素細胞と栄養細胞の間の結合組織および栄養細胞を囲む膜組織に抗STX抗体との強い発色が認められた。これらの組織において反応は膜系にのみ認められ、細胞質の染色はされなかった。毛嚢内腔や毛嚢壁上皮細胞には反応は見られなかった。透過型電子顕微鏡による免疫染色結果では、中腸腺結合組織内や細管内に存在する白血球様細胞の細胞質に発色が認められた。緒方らは有毒渦鞭毛藻の発生が殆ど認められない陸奥湾から採取したムラサキイガイや琵琶湖産のシジミに来源が特定できない微量のPSPが存在することを報告している。同様の現象は香港海域でも観察されている。そこで、2001年3月6日に山田湾で採集した無毒ホタテガイを同様に観察したところ、発色程度は若干弱いものの、結合組織および栄養細胞を囲む膜組織が同様に染色された。この結果は、微量のPSPがタンパクに結合した状態で、時期、場所を問わず貝類に存在し、同タンパクからの遊離を含めた毒の代謝が貝の毒化を考える上での新たなファクターになることを示唆する。そこで市販のホタテガイ、ムラサキイガイ、カキ、ホヤの無毒検体を入手し、これらから摘出した中腸腺抽出物を30℃でインキュベートし、経時的に毒を抽出してHPLCで測定したところ、PSP毒量が増加する現象が観察された。この結果は上記の考え方を支持する。

The midgut gland of Ofunato Bay was fixed, dehydrated, resin-embedded and thin-cut sections were prepared, and the development of anti-tumor antibody, anti-tumor IgG antibody, and PSP were visualized. The results showed that Alexandria tamarense was toxic from June 12, 2000 to June 11, 2001. The enzyme cells of midgut glandular trichomes and the intermediate binding tissues of cultured cells and membrane tissues showed strong anti-STX antibodies. The tissue of the cell is stained with the cytoplasm of the cell. The epithelial cells of the hair lumen are reversed. Immunostaining by transmission electron microscopy revealed the presence of leukocytes in the connective tissue and tubules of the midgut. Ogata reported the existence of trace amounts of PSP from specific sources. The same phenomenon is observed in Hong Kong waters. On March 6, 2001, Yamada Bay collected non-toxic and non-toxic tissues. The same staining was observed. The degree of staining was weak. The combined tissues were cultured and the membrane tissues were stained. The results show that trace amounts of PSP are present in shellfish, and that there are new forms of PSP in shellfish. The increase in PSP toxicity was observed when the toxic substances were extracted from the intestinal gland extract at 30℃ and the toxic substances were extracted at 30℃. The results of this study are supported by the above test.