電位依存性カリウムMチャンネルの受容体による制御機構の解明

阐明电压门控钾 M 通道受体介导的控制机制

• 批准号: 12770017
• 负责人: 星 直人
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770017/
• 关键词: 電位依存性カリウムチャンネル; チャンネル制御分子; シグナル伝達; リン酸化

受容体刺激によるMチャンネル抑制は、神経興奮性を制御する重要な機構の一つであるが、このシグナル伝達系については十年来混乱している。我々は近年Mチャンネル本体と同定されたKCNQ2, 3チャンネルを用いてムスカリン作動性アセチルコリン受容体(M_1)刺激からのシグナル伝達経路を解析した。今回特にAKAP150がプロテインキナーゼC(PKC)、カルシネウリン、カルモジュリンと結合することに注目し、KCNQ2/3チャンネル修飾におけるAKAP150の関与を、部分欠損変異体を用いて解析した。PKC結合部位欠損変異体において、受容体によるチャンネル修飾が消失しこれらの複合体がなんらかの役割をはたしていることが明らかになった。更にこの複合体を解析するため、filter overlay法によりチャンネルとAKAP150の相互作用を調べたところ両者が直接結合することが分かった。従来、PKCの関与は、PKC阻害薬が受容体修飾を解除できないことから否定的と考えられていた。数種類のPKC阻害剤を投与したところ、PKCの活性中心に結合するbisindolylmaleimide、chelerythrineは効果がなく、ジアシルグリセロール結合領域に作用するcalphostin、safingolだけがM電流抑制を解除した。AKAP150がPKCの活性中心に結合することが知られているので、複合体形成により、ある種のPKC阻害剤の標的部位が保護されていると考えられた。このことを検証するため、^<32>Pを用いた代謝ラベル法によりチャンネルのリン酸化を測定したところ、KCNQ2チャンネルのリン酸化は、電気生理と同様の結果が得られ、複合体形成によりPKC阻害剤の感受性が変化することが分かった。以上、今回の研究からMチャンネルはAKAP150と複合体を形成しその構成要素のPKCにより制御されていることが明らかになった。

A decade of confusion has been observed in the control of neuroexcitability and the inhibition of neurogenesis by receptor stimulation. In recent years, we have been analyzing the mechanism of M_1 stimulation and the mechanism of M_1 stimulation in KCNQ2, 3. In this paper, AKAP 150 is specially analyzed for its close relationship with KCNQ2/3 and partial loss due to its combination of C(PKC), C(PKC) and C(PKC). PKC binding site is deficient in foreign material, receptor is deficient in foreign material. In addition, the complex analysis and filter overlay method are used to adjust the interaction between AKAP150 and AKAP150. The relationship between PKC and PKC and the modification of the receptor are removed. Several kinds of PKC inhibitors are present in the active center of PKC, such as bisindolylmaleimide and chelerythrine, which act as calphostin and safingol inhibitors. AKAP150 binds to the PKC active center and protects the PKC target site from complex formation. The <32>results of this study include: (1) the sensitivity of PKC inhibitors to complex formation;(2) the sensitivity of PKC inhibitors to complex formation; and (3) the sensitivity of PKC inhibitors to complex formation. In the present study, AKAP150 complex was formed and PKC was controlled.

项目成果

Higashida, H. et al.: "Cyclic ADP-ribose as a second messenger downstream of angiotensin II receptors in mammalian heart cells"Jpn. A. Appl. Physiol.. 31. 11-17 (2001)

Higashida，H.等人：“环状ADP-核糖作为哺乳动物心脏细胞中血管紧张素II受体下游的第二信使”Jpn。

Higashida, H. et al.: "Cyclic ADP-ribose as a potential second messenger for neuronal Ca2+signaling"J Neurochem.. 76(2). 321-331 (2001)

Higashida, H. 等人：“环状 ADP-核糖作为神经元 Ca2 信号传导的潜在第二信使”J Neurochem.. 76(2)。

Higashida, H. et al.: "Signal transduction from bradykinin, angiotensin, adrenergic and muscarinic receptors to effector enzymes, including ADP-ribose cyclase"Biological Chem. 382(1). 23-30 (2001)

Higashida，H.等人：“从缓激肽、血管紧张素、肾上腺素能和毒蕈碱受体到效应酶（包括ADP-核糖环化酶）的信号转导”Biological Chem。

Hoshi, N. et al.: "Slow Synaptic Responses and Modulation"Three types of cerebellar voltage-gated K^T currents expressed in Xenopus oocytes. Eds. K. Kuba, H.Higashida, D.A.Brown and T.Y oshioka. Springer-Verlag. 93-99 (1999)

Hoshi, N. 等人：“慢突触反应和调节”爪蟾卵母细胞中表达的三种小脑电压门控 K^T 电流。

Higashida,H., et al.: "Cyclic ADP-ribose as a potential second messenger for neuronal Ca2+ signaling."J.Neurochem. 76. 321-331 (2000)

Higashida, H., et al.：“环状 ADP-核糖作为神经元 Ca2 信号传导的潜在第二信使。”J.Neurochem。