H型α(1,2)フコース転移酵素遺伝子の発現制御に関与する転写因子の同定

调控H型α(1,2)岩藻糖基转移酶基因表达的转录因子的鉴定

• 批准号: 12770224
• 负责人: 副島 美貴子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770224/
• 关键词: ABO血液型; FUT1; 発現調節; H物質; ABO式血液型; フコース転移酵素; ラット; 転写調節

H型α(1,2)フコース転移酵素遺伝子のプロモータ-領域内で、ヒトとげっ歯類の種を超えて保存されており転写の活性化に重要であると考えられる37bpに結合するタンパク質をコードする遺伝子のクローニングを0ne hybrid systemを用いておこない、得られた数種のクローンについてそのシークエンスを決定した。その結果、これらのクローンのうちいくつかはライブラリーとして用いた肝臓で発現している遺伝子ではあるが転写因子ではないことが明らかなタンパク質をコードしているものと、これまでに同定されていない未知の遺伝子であった。そこで未知のものに関して、実際に37bpのDNA断片に結合するのかどうかを知るため、大腸菌の系でリコンビナントタンパク質を作成し、37bpのプローブに対するゲルシフトアッセイをおこなったところ、特異的なシフトしたバンドは得られなかった。さらにこの遺伝子を真核細胞発現ベクターに組み込み、H型α(1,2)フコース転移酵素遺伝子プロモーターのレポーターコンストラクトと同時にトランスフェクションをおこない転写活性の変化を調べたが、活性化能は認められなかった。これらのことから得られたクローンは偽陽性であると考えられた。その原因としてはバイトコンストラクトに問題がある、つまり絞られた37bpのバイト領域のみでは特異的な転写因子の結合には十分ではないことが考えられ、現在この領域を含む、より長い断片を用いて解析をおこなっている。またcDNAライブラリーについても、今回用いた組織由来以外のものについて検討をおこなっている。

H alpha (1, 2) フ コ ー ス heritage planning shift enzyme 伝 son の プ ロ モ ー で タ - field, ヒ ト と げ っ 歯 class の を super え て save さ れ て お り planning write の activeness に important で あ る と exam え ら れ る 37 bp に combining す る タ ン パ ク qualitative を コ ー ド す る heritage 伝 son の ク ロ ー ニ ン グ を 0 ne hybrid System を with い て お こ な い, ら れ た several の ク ロ ー ン に つ い て そ の シ ー ク エ ン ス を decided し た. そ の results, こ れ ら の ク ロ ー ン の う ち い く つ か は ラ イ ブ ラ リ ー と し て in い た routine liver で 発 now し て い る posthumous son 伝 で は あ る が planning write factor で は な い こ と が Ming ら か な タ ン パ ク qualitative を コ ー ド し て い る も の と, こ れ ま で に with fixed さ れ て い な い unknown の heritage 伝 son で あ っ た. そ こ で unknown の も の に masato し て, be interstate に 37 bp DNA fragment の に combining す る の か ど う か を know る た め, coliform の で リ コ ン ビ ナ ン ト タ ン パ ク を し consummate, 37 bp の プ ロ ー ブ に す seaborne る ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ を お こ な っ た と こ ろ, specific な シ フ ト し た バ ン ド は must ら れ な か っ た. さ ら に こ の heritage 伝 を eukaryotic cells 発 now ベ ク タ ー に group み 込 み, H alpha (1, 2) フ コ ー ス heritage planning shift enzyme 伝 son プ ロ モ ー タ ー の レ ポ ー タ ー コ ン ス ト ラ ク ト と simultaneously に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン を お こ な い の planning write activity - the を adjustable べ た が, activation can は め ら れ な か っ た. The false positive であると test えられた is obtained by <s:1> れら <s:1> と と ら られた ロ ロ <s:1> であると であると false positive であると. そ の reason と し て は バ イ ト コ ン ス ト ラ ク ト に problem が あ る, つ ま り ground ら れ た 37 bp の バ イ ト field の み で は specific な planning write factor の combining に は very で は な い こ と が exam え ら こ れ, now の field を む, よ り い を fragment with い て parsing を お こ な っ て い る. ま た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー に つ い て も, this reuse い た tissue origin outside の も の に つ い て beg を 検 お こ な っ て い る.

项目成果

M.Soejima,Y.Koda,B.Wang,H.Kimura.: "Functional analysis of the 5'-flanking region of FTA for expression of rat GDP-L-fucose : β-D-galactosidase 2-α-L-fucosyltransferase."Eur.J.Biochem. 266. 274-281 (1999)

M. Soejima、Y. Koda、B. Wang、H. Kimura.：“针对大鼠 GDP-L-岩藻糖表达的 FTA 5-侧翼区域的功能分析：β-D-半乳糖苷酶 2-α-L-岩藻糖基转移酶。”Eur.J.Biochem.266.274-281(1999)

Y.Koda,Y.Watanabe,M.Soejima,E.Shimada M.Nishimura,K.Morishita,S.Moriya,S.Mitsunaga,K.Tadokoro,H.Kimura: "Simple PCR detection of haptoglobin gene deletion in anhaptoglobinemic patients with antihaptoglobin antibody that causes anaphylactic transfusion rea

Y.Koda,Y.Watanabe,M.Soejima,E.Shimada M.Nishimura,K.Morishita,S.Moriya,S.Mitsunaga,K.Tadokoro,H.Kimura：“简单 PCR 检测非触珠蛋白血症患者触珠蛋白基因缺失

Y.Koda,M.Soejima,P.H.Johnson,E.Smart,H.Kimura.: "An Alu-mediated large deletion of the FUT2 gene in individual with the ABO-Bombay phenotype."Hum.Genet.. 106. 80-85 (2000)

Y.Koda,M.Soejima,P.H.Johnson,E.Smart,H.Kimura.：“ABO-孟买表型个体中 Alu 介导的 FUT2 基因大缺失。”Hum.Genet.. 106. 80-

Koda Y, et al.: "Contrasting patterns of polymorphisms at the ABO-secretor gene (FUT2) and plasma alpha (1,3) fucosyltransferase gene (FUT6) in human populations"Genetics. 158(2). 747-756 (2001)

Koda Y 等人：“人类 ABO 分泌基因 (FUT2) 和血浆 α (1,3) 岩藻糖基转移酶基因 (FUT6) 多态性的对比模式”遗传学。

Pang H, et al.: "Polymorphism of the human ABO-Secretor locus (FUT2) in four populations in Asia : indication of distinct Asian subpopulations"Ann Hum Genet. 65(Pt 5). 429-437 (2000)

Pang H 等人：“亚洲四个人群中人类 ABO 分泌基因座 (FUT2) 的多态性：不同亚洲亚群的指示”Ann Hum Genet。