权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Usefulness of nucleic acid amplification in search for responsible bacteria for sepsis.

核酸扩增在寻找脓毒症致病细菌中的作用。

基本信息

批准号：
22K10622
负责人：
副島美貴子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

法医解剖事例は、検体採取時のコンタミネーションに加え、腐敗細菌や腸内細菌の増殖などの法医試料に特徴的な要因で、死体試料から特定の細菌が分離、同定されたとしても、それが原因菌であると断定できないという問題があり、敗血症を確実に診断することは難しい。しかし、同定された菌種による感染と解剖・検査所見との間に整合性が確認されるケースもあり、原因菌として矛盾しない微生物の存在の証明は法医診断に有用である。本研究計画では、viability PCR法（生細菌を選択的に増幅するPCR法）を利用した増幅法や核酸抽出法の検討をおこない、法医領域での敗血症原因菌の検索における核酸増幅の有用性を検証する。今年度は、過去の敗血症が疑われた解剖事例に同定された菌種をリスト化し、主要な菌種の純培養菌を購入し、これらを用いて生菌・死菌の分別条件の検討をおこなった。分別には、死菌由来DNAをDNA修飾色素であるEMA (ethidium monoazide)を用いて修飾することでPCR増幅を抑制し生菌由来DNAのみ検出する方法を用いた。EMA処理は、細菌にEMAを含む試薬を添加し浸透させた後、光照射（精度の高い安定したデータ取得が可能な専用装置を本研究費で購入した）するとEMAによりDNAが化学修飾される。純培養菌の生菌と死菌を準備し、EMA処理の時間や回数、EMA濃度を変えて、それぞれの菌種について、最適な死菌抑制効果が得られるEMA処理条件の検討をおこなった。死菌は、熱処理により膜を損傷することで調整し、DNAを抽出、確認は16S rRNA のPCR増幅によりおこなった。

Forensic autopsy cases include: identification of bacteria, spoilage bacteria, growth of intestinal bacteria, and characteristics of forensic samples; identification of specific bacteria from dead samples; identification of the causative bacteria; determination of problems; and determination of the diagnosis of blood poisoning. The identification of the same species, the identification of infections, the identification of the same species, the same species, the identification of the same species, the same species, the identification of the same species, the identification of the same species, the same species, the identification of the same species, the identification of the same species, the same This study aims to demonstrate the usefulness of amplification of nucleic acids in the detection of pathogenic bacteria in the forensic field by using amplification and nucleic acid extraction methods. This year, the past cases of blood poisoning are suspected, and the same species are identified, and the main species are purchased in pure culture, and the conditions for the use of live bacteria and dead bacteria are discussed. The method of DNA modification by EMA (ethidium monoazide) and PCR amplification inhibition by DNA modification by DNA from dead bacteria were used. EMA treatment, bacterial EMA, DNA chemical modification, penetration, light irradiation (high precision, stability, availability, equipment purchased for this study) The preparation of pure culture bacteria, the number of EMA treatment times, the concentration of EMA, the selection of different species, the optimal inhibition effect of EMA treatment conditions DNA extraction and PCR amplification of 16S rRNA were confirmed.