インターフェロンによるC型肝炎ウイルス蛋白翻訳抑制機構の解明

阐明干扰素抑制丙型肝炎病毒蛋白翻译的机制

• 批准号: 12770254
• 负责人: 本多 政夫
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770254/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; Internal ribosomal entry site; インターフェロン

我々は、先にサイトメガロウイルスプロモーターの下流にRenilla luciferase(R-luci), HCVの5'NTR, Firefly luciferasc(F-luci)の順で遺伝子を組み込んだベクターを作成し、この遺伝子を恒常的に発現しているHuh-7由来細胞を樹立した。この樹立細胞では、R-luciは通常の真核生物の蛋白翻訳機構であるキャップ依存性に、F-luciはHCVの5'NTRによりIRES依存性に翻訳される。この樹立細胞を用いた検討でHCVの蛋白翻訳効率は細胞分裂期で高いことを見いだしている(Gastroenterology118, 152-162, 2000)。今回、インターフェロン及び二本鎖RNA(Poly I : Poly C)処理によりIRES依存性蛋白翻訳が特異的に抑制されることを見いだした。この作用メカニズムを解明するため、インターフェロンによる、2-5AS(oligoadenylate synthetase)活性の誘導、PKR(2本鎖RNA依存性プロテインキナーゼ)の活性化、及びHCV-IRESを活性化させる宿主蛋白であるLa protein、及びPyrimidine tract binding protein(PTB)の発現を検討した。インターフェロンの投与により2-5ASは著名に上昇したが、Poly I : Poly C投与では活性の上昇は顕著でなかった。PKRの発現はインターフェロン、Poly I : Poly C投与で上昇したが、トランスフェクションによるPKR発現過剰状態ではIRES活性の特異的抑制は見られなかった。一方、IRES活性化因子のLa proteinはインターフェロン、Poly I : Poly C投与で発現が著名に抑制され、PTB及びコントロールとして用いたアルブミンの発現には変化が認められなかった。また、La proteinの過剰発現により、インターフェロン、Poly I : PolyCによる特異的IRES活性抑制は消失した。以上より、La proteinの発現がインターフェロンの抗ウイルス活性に影響を与えていることが明らかとなった(Hepatology35, 199-208, 2002)

I 々 は, first に サ イ ト メ ガ ロ ウ イ ル ス プ ロ モ ー タ ー の obscene に Renilla luciferase (R - luci), HCV 5 'の NTR, Are luciferasc (F - luci) の shun で posthumous son 伝 を group み 込 ん だ ベ ク タ ー を し, consummate こ の posthumous son 伝 を constant に 発 now し て い る Huh - 7 origin cells を set し た. こ の set cell で は, R - luci は の eukaryotes の protein usually turn 訳 institutions で あ る キ ャ ッ プ dependency に, F - luci は HCV の 5 'NTR に よ り IRES dependency に turn 訳 さ れ る. こ の set cells を using い た beg で 検 HCV の egg whites 訳 sharper rate high は cell division period で い こ と を see い だ し て い る (Gastroenterology118, 152-162, 2000). Today, back イ ン タ ー フ ェ ロ ン and び 2 lock RNA (Poly real I: C) Poly real 処 Richard に よ り IRES dependence protein turn 訳 が specific に inhibit さ れ る こ と を see い だ し た. こ の role メ カ ニ ズ ム を interpret す る た め, イ ン タ ー フ ェ ロ ン に よ る, 2-5 as (oligoadenylate <s:1> induction of synthetase activity, <s:1> activation of PKR(2-lock-RNA dependent プロテ <s:1> キナ キナ ゼ ゼ ゼ), びHCV-IRESを activation of させる host protein であるLa protein, and びPyrimidine tract binding protein(PTB) を検 claims た. イ ン タ ー フ ェ ロ ン の cast with に よ り 2-5 as famous は に rise し た が, Poly real I: Poly real C cast and で は active の rise は 顕 the で な か っ た. PKR の 発 now は イ ン タ ー フ ェ ロ ン, Poly real I: Poly real C cast and a rise in で し た が, ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン に よ る PKR 発 now turning state で は IRES inhibition は の specific see ら れ な か っ た. Party, IRES activity factor の La protein は イ ン タ ー フ ェ ロ ン, Poly real I: Poly real C cast and で 発 が now famous に inhibit さ れ, PTB and び コ ン ト ロ ー ル と し て in い た ア ル ブ ミ ン の 発 now に は variations change が recognize め ら れ な か っ た. ま た, La protein の before turning 発 now に よ り, イ ン タ ー フ ェ ロ ン, Poly real I: PolyC に よ る specific inhibiting は IRES disappeared し た. Above よ り, La protein の 発 now が イ ン タ ー フ ェ ロ ン の resistance ウ イ ル に ス activity を and え て い る こ と が Ming ら か と な っ た (Hepatology35, 199-208, 2002)

项目成果

Takeo Shimazaki et al.: "Inhibition of Internal Ribosomal Entry Site-Directed Translation of HCV by Recombinant IFN-a Correlates With a Reduced La Protein"Hepatology. 35. 199-208 (2002)

Takeo Shimazaki 等人：“重组 IFN-α 对 HCV 内部核糖体进入位点定向翻译的抑制与减少的 La 蛋白相关”肝病学。

Masao Honda: "Differential Gene Expression Between Chronic Hepatitis B and C Hepatic Lesion"Gastroenterology. 120. 955-966 (2001)

Masao Honda：“慢性乙型肝炎和丙型肝炎肝病变之间的差异基因表达”胃肠病学。

Masao Honda: "Natural variation in translational activities of the 5′nontranslated RNAs of hepatitis C virus genotypes 1a and 1b : evidence for a long-range RNA-RNA interaction outside of the internal ribosomal entry site"Journal of Virology. 73. 4941-495

Masao Honda：“丙型肝炎病毒基因型 1a 和 1b 5非翻译 RNA 翻译活性的自然变异：内部核糖体进入位点之外的长程 RNA-RNA 相互作用的证据”《病毒学杂志》73。 4941-。第495章

Masao Honda: "Steatosis and liver cancer in transgenic mice expressing the structural and nonstructural proteins of hepatitis C virus"Gastroenterology. 122. 352-365 (2002)

Masao Honda：“表达丙型肝炎病毒结构和非结构蛋白的转基因小鼠的脂肪变性和肝癌”胃肠病学。

Masao Honda: "Differential Gene Expression Between Chronic Hepatitis B and C Hepatic Lesion."Gastroenterology. 120. 955-966 (2001)

Masao Honda：“慢性乙型肝炎和丙型肝炎肝病变之间的基因表达差异。”胃肠病学。