肝微小環境の構造理解に基づく新たな代謝性肝疾患治療の確立

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NASHは脂肪化・炎症・線維化を伴って進行し、肝不全や肝発癌発生の要因となる。本申請では、Sema6Aの肝類洞内皮における本来の生理機能を解き明かすことにより、肝再生機構、肝類洞の細動脈化機構、線維化、炎症の機転を解明することを目的とする。また、Sema6Aの発現低下と自律神経系路の分布異常との関連を明らかにし、自律神経制御異常によって引き起こされる肝の代謝障害の機序を解明する。本年度は肝類洞内皮特異的Sema6A KOマウスに高脂肪食負荷を与え、肝組織の遺伝子発現をscRNA-seqにて解析した。肝星細胞の増加に加え、胆管細胞、クッパー細胞の増加が見られ、未分化な肝類洞内皮細胞の増加も認められた。以上より、Sema6Aは肝類洞内皮細胞及びその周辺細胞の分化に関与していることが示唆された。PlexinA2特異的に結合する分泌型Sema6aを肝線維化モデルであるPDGF-C Tgマウスに投与すると、迷走神経の求心性伝達が有意に抑制されることが解った。Sema6aの自律神経制御との関連が示唆された。Sema6A-PlxnA2シグナル関連パスウェイが亢進もしくは抑制される化合物を探索した。その結果、SEMA6A, SEMA3C, PLXNA2, RND3の４つの遺伝子についてそれぞれ17, 18, 15, 17の化合物が出力され、重複を取り除くと33化合物が得られた。肝細胞選択的なSema6Aのdeliveryシステムの開発に向けて、Sema6A細胞外ドメインのC末に抗ASGR一本鎖抗体scFvを連結する方法について検討し、Sema6AのC末とscFvのC末にそれぞれ別々のペプチドタグを融合したタンパク質をHEK293で発現し、連結可能であることを確認できた。さらに、ヒトASGRとマウスASGR（類似性80％）の両方に結合するVHドメイン抗体を取得することに成功した。