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LIFによるCaMKI,IVの活性化機構の解明と心肥大形成におけるその意義

阐明LIF激活CaMKI,IV的机制及其在心肌肥大形成中的意义

基本信息

批准号：
12770354
负责人：
加藤隆弘
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770354/
关键词：
LIF CaMK 心肥大

项目摘要

我々はこれまでLIFが成獣ラット心筋細胞のL型Ca-channelを介したCa2+電流を増大すること、これに伴い心筋[Ca2+]-transientが増大すること、このシグナル伝達にはMAPK系が関与することを報告した[J Mol Cell Cardiol.1999;31]。これに引き続きこのLIFのL型Ca2+-Channelを介したCa2+電流増大作用がCa2+/Calmodulin-Calmodulin dependent protein kinase II(CaMK II)を活性化すること、CaMKIIの活性化が心肥大に関与していることを見出した(Circ Res.2000;87)。ラット新生児心筋細胞の初代培養を行った。初代培養した心筋に対し、無血清培養24時間後にLIF 1000u/mlにて心筋細胞の刺激を行いCaMK I,CaMK IVの活性の上昇を確認し続いて以下をおこなった。【Perforated pach clump法及び蛍光色素による[Ca2+]-transient測定】LIFがラット新生児心筋細胞のL型Ca-channelを介したCa2+電流が増大し、これに伴い心筋[Ca2+]-transientが増大した。【ゲルシフト法】LIF刺激した細胞より核分画を抽出する。抽出した核分画に対し、CaMK I,CaMK IVの下流にあるCREB等のゲルシフトアッセイを行、CREBの活性化及び、これに対しCaMK I、CaMK IVのDN form transfectionがこの活性を抑制することを確認した。【細胞面積】LIF刺激した細胞と対照の細胞を固定し、ミオシンの抗体による免疫蛍光写真を撮影後コンピューターに取り込み、細胞面積の測定を行った。LIFによる細胞面積の増加に対し、CaMK I、CaMK IVのDN form transfectionの抑制作用を認めた。

I use LIF as a heart muscle cell as a L-type Ca-channel, and I use a Ca2+ current to increase the size of the heart muscle cells. [Ca2+]-Transient が嗗大すること、このシグナル伝达にはMAPK SYSTEM and することをreport した[J Mol Cell Cardiol. 1999;31].これに影き続きこのLIFのL-type Ca2+-Channel したCa2+ current amplification effectがCa2+/Calmodulin-Calmodulin dependent protein kinase II (CaMK II) Activation of CaMKII, Activation of CaMKII, Heart Hypertrophy, and Activation of CaMKII (Circ Res. 2000; 87). The primary culture of neonatal cardiomyocyte cells was carried out. After 24 hours of serum-free culture, cardiac muscle cells were stimulated with LIF 1000u/ml and the activity of CaMK I and CaMK IV increased. 【Perforated pach clump method and measurement of photopigment [Ca2+]-transient】L-type C of LIF neonatal myocardial cells a-channel したCa2+ current が Increase large し, これにband い心丝[Ca2+]-transient が Increase large した. 【ゲルシフトmethod】 LIF stimulates the cells and separates the nuclei and extracts them. Extraction of nuclear separation and activation of CaMK I and CaMK IV IVのDN form transfectionがこのActivityをInhibitionすることをConfirmationした. [Cell area] LIF stimulates cells, cells are fixed, and antibodies are fixed After the immunophotography was taken, the cells were taken and the cell area was measured. The inhibitory effect of LIF on cell area increase and DN form transfection on CaMK I and CaMK IV is recognized.