拡張型心筋症における新規自己抗体「抗Na-K-ATPase抗体」の催不整脈作用

抗Na-K-ATPase抗体の有性鶏卵に対する催不整脈作用蛍光免疫染色法およびwestern blottin法にて心筋細胞膜Na-K-ATPaseポンプに対する抗原抗体反応を確認している、拡張型心筋症患者5例の血清からAffi-Gel protein-A MAPS II kit (Bio-rad)によって免疫グロブリンG(IgG)を精製した。有性鶏卵に精製IgGを2.0mg/卵(各々n=10)ずつ添加し、投与60分間の催不整脈効果を観察した。pGEX発現ベクターによって、Na-K-ATPaseのαサブユニット(α1〜3)およびβサブユニット(β1〜2)を産生精製後、各1.0mg/卵ずつ前投与して、精製IgGの催不整脈効果がブロックされるか観察した。全患者5例で催不整脈効果が完全ブロックされたのは、α3サブユニット前投与のみであったため、pGEXベクターをplasmid delitionして、本自己抗体のエピトープを同定した。その結果、同サブユニットの中でもM7-M8αループを形成する第871〜895アミノ酸のみが、本自己抗体の催不整脈作用をブロックしたため、同配列内にエピトープが存在することが示唆された。Na-K-ATPase自己免疫ラットモデルの作成本ラットモデルにおける心筋細胞膜Na-K-ATPaseの変化を、比色定量法、Western blotting法、Nothern blotting法によって、測定した。本ポンプ活性は、免疫2ヶ月より低下を示し、免疫6ヶ月後まで持続していた。Western blottingでは、α1およびα2には有意な変化を認めず、発現量が少なかったα3のみ有意な減少を認めた。この変化は、Nothern blottingにおいてもmRNAレベルで観察された。これらのアイソホーム変化は、通常の肥大心で観察されるものとは異なり、本モデル特異的な現象であることが示唆された。

抗Na-K-ATPase抗体の有性鶏卵に対する催不整脈作用蛍光免疫染色法およびwestern blottin法にて心筋細胞膜Na-K-ATPaseポンプに対する抗原抗体反応を確認している、拡張型心筋症患者5例の血清からAffi-Gel protein-A MAPS II kit (Bio-rad)によって免疫グロブリンG(IgG)を精製した。有性鶏卵に精製IgGを2.0mg/卵(各々n=10)ずつ添加し、投与60分間の催不整脈効果を観察した。pGEX発現ベクターによって、Na-K-ATPaseのαサブユニット(α1〜3)およびβサブユニット(β1〜2)を産生精製後、各1.0mg/卵ずつ前投与して、精製IgGの催不整脈効果がブロックされるか観察した。全患者5例で催不整脈効果が完全ブロックされたのは、α3サブユニット前投与のみであったため、pGEXベクターをplasmid delitionして、本自己抗体のエピトープを同定した。その結果、同サブユニットの中でもM7-M8αループを形成する第871〜895アミノ酸のみが、本自己抗体の催不整脈作用をブロックしたため、同配列内にエピトープが存在することが示唆された。Na-K-ATPase自己免疫ラットモデルの作成本ラットモデルにおける心筋細胞膜Na-K-ATPaseの変化を、比色定量法、Western blotting法、Nothern blotting法によって、測定した。本ポンプ活性は、免疫2ヶ月より低下を示し、免疫6ヶ月後まで持続していた。Western blottingでは、α1およびα2には有意な変化を認めず、発現量が少なかったα3のみ有意な減少を認めた。この変化は、Nothern blottingにおいてもmRNAレベルで観察された。これらのアイソホーム変化は、通常の肥大心で観察されるものとは異なり、本モデル特異的な現象であることが示唆された。