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ジアシングリセロールキナーゼの皮膚における局在及び機能の解析

二酰甘油激酶在皮肤中的定位和功能分析

基本信息

批准号：
12770422
负责人：
川口雅一
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

diacylglycerol kinase(DGK)は、protein kinase C(PKC)を活性化させるdiacylglycerol(DG)の代謝酵素であり、現在のところ脳などでの組織特異的発現が明らかにされ、数種のアイソタイプが報告されているが、皮膚におけるアイソタイプの発現は全く知られていない。本研究では、皮膚におけるDGKアイソタイプの発現とその局在を明らかにした。ラットの皮膚における各アイソタイプ(DGKI,II,III,IV,V型,ADGK)の発現をNorthern blotting法により解析した結果I,IV、ADGKが発現していた。その局在をin situ hybridization法で検討すると、各アイソザイムのすべてが表皮と毛包に発視が見られた。その発現は表皮よりもむしろ毛包上皮に強い発現が見られ、毛包成長と共に発現量が増していた。さらに表皮でのDGK発現を明らかにするためラット表皮の初代培養細胞を用いて解析した。生後すぐラットの皮膚を剥離し、ディスパーゼ処理し、表皮細胞をKGM培地(低Ca培地)で単層培養した細胞群、その後DMEM+10%血清(高Ca培地)にし、重層させた細胞群の各々からNorthern blotting法により解析した結果、両者ともI,IV、ADGKが発現していたが、低Ca培地ではI型の発現が弱く高Ca培地にすると発現量が増した。IV型では逆に高Ca培地より低Ca培地で発現量が多かった。ADGKでは両者に差は見られなかった。この事は表皮細胞の基底細胞ではIV型の発現が多く、分化して有棘細胞になるとI型が多く発現することを意味する。以上からDGKのアイソタイプが表皮細胞の角化にI型、IV型が各々関与する可能性が示唆された。さらにDGK-I型、IV型は表皮細胞において、増殖や分化にかかわる転写因子などにより遺伝子発現調節されていることが示唆された。

Diacylglycerol kinase(DGK), protein kinase C(PKC) are activated to metabolize diacylglycerol(DG), and tissue-specific reactions in the skin are now well known. This study was conducted in the light of the development of skin and skin diseases. Northern blotting analysis of the development of DGKI,II,III,IV,V, ADGK in the skin of the rat was carried out. All of them are in situ hybridization. In addition, the development of hair follicles and hair follicles increased. The DGK in the epidermis was analyzed by using primary cultured cells. The results of Northern blotting analysis of epidermal cells cultured in KGM medium (low Ca medium) and in DMEM+10% serum (high Ca medium) were as follows: Type IV is the most common type of high Ca medium. ADGK This means that there are more types IV and I in basal cells of epidermal cells. The above results indicate the possibility that DGK may be involved in keratinization of type I and type IV cells. DGK-I and DGK-IV epidermal cell differentiation, proliferation and differentiation are regulated by gene expression factors.