皮膚におけるTNF-α変換酵素の機能解析

皮肤TNF-α转换酶的功能分析

• 批准号: 21791059
• 负责人: 川口 雅一
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21791059/
• 关键词: 皮膚; TNF-α; TACE; シグナル伝達; 遺伝子改変マウス

TNFα converting enzyme(TACE)のsiRNAをもちいてケラチノサイトで各種の実験を行った。TACEのsiRNAによりTACE mRNAの発現はreal time PCRにより検討したところ、80%ほど抑制された。TACE阻害剤を用いた実験では、阻害剤はケラチノサイトの遊走阻止効果やサイトカイン刺激によるケラチノサイトからのケモカイン産生を調節している結果が得られていたがsiRNAでは同様の効果は見られなかった。数種類のsiRNAで効果を検討したが、結果は同じであった。TACE阻害剤を用いてメラノーマcell lineに対して細胞死を誘導するか検討した。メラノーマcell lineをTACE阻害剤で処理した後、TNF-αで刺激し、24から48hr後の細胞数を計測した。TACE阻害剤とTNF-αは、今回検討したcell lineに対しては影響は見られなかった。今後TNF-α以外のligandで検討する予定である。また、SCCおよびmelanomaのcell lineや、手術で切除してきた組織を用いてTACEの発現や活性を測定するために標本を集積中である。TACEの基質の多くはADAM10の基質にもなりうるため、ADAM10およびEGFRなどを併せて検討を加える予定である。TACEcDNAをGFPを含んだベクターに挿入しケラチノサイトに遺伝子導入した。今後各種の刺激によるTACEの細胞内局在の変化を検討する予定である

TNFα converting enzyme(TACE) siRNA can be used in various ways. Expression of TACE mRNA was detected by real-time PCR and inhibited by 80% inhibition. TACE inhibitor is used to regulate the production of siRNA, which is the same effect as TACE inhibitor. Several siRNAs were detected and the results were the same. TACE inhibitors are used in cell line induction. The number of cells was measured 24 hours after TACE inhibition and 48 hours after TNF-α stimulation. TACE inhibitor TNF-α is present in the cell line. The future ligands other than TNF-α will be discussed. Cell line of SCC and melanoma, surgical resection of tissue, and detection of TACE activity The matrix of TACE is more than ADAM10. The matrix of ADAM10 is more than EGFR. TACE cDNA contains GFP, which is introduced into the genome. The future of TACE in the cellular phase of the study