動物モデルを用いた神経芽細胞腫骨転移メカニズムの解析

神经母细胞瘤骨转移动物模型分析机制

• 批准号: 12770417
• 负责人: 道上 敏美
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770417/
• 关键词: 神経芽細胞腫; 破骨細胞; RANKL; osteoprotegerin; ヌードマウス

小児の固形腫瘍の中で、脳腫瘍に次いで頻度の高い神経芽細胞腫はしばしば骨に転移し、骨転移を有する症例は予後不良である。本研究では、神経芽細胞腫の骨転移のメカニズムを明らかにすることを目的として、ヌードマウス皮下への移植実験により骨、骨髄への転移能を有するヒト神経芽細胞腫細胞株を選択した。その結果、神経芽細胞腫細胞株NB-19がヌードマウスへの移植により骨、骨髄に転移しうることをX線撮影、PCR-based micrometastasis assayにより確認した。そこで、NB-19細胞と宿主細胞との骨髄局所における相互作用を検討する目的で、NB-19細胞とマウス骨髄細胞との共存培養を行ったところ、酒石酸抵抗性酸フォスファターゼ陽性で多核の破骨細胞様細胞が形成された。このことは、NB-19と骨髄細胞との共存培養下では破骨細胞の誘導に関わるサイトカインの発現が増加することによるのではないかと考え、RT-PCRによる解析を行ったところ、共存培養においては骨髄細胞の単独培養と比較してIL-1α,cyclooxygenase-2(COX-2), RANKL(ReceptorActivator of Nuclear Factor κB Ligand)の発現が上昇していた。RANKLは破骨細胞形成において鍵となるサイトカインであり、IL-1αやプロスタグランジンはRANKLの誘導因子である。これらの結果から、神経芽細胞株NB-19と骨髄細胞との相互作用により、炎症性サイトカインの産生が引き起こされ、RANKLの発現増強を介して破骨細胞を誘導するものと考えられた。この仮説をさらに検討するため、RANKLに対するデコイ受容体であり内在性阻害分子として機能するosteoprotegerinのリコンビナント蛋白を作製し、NB-19と骨髄細胞の共存培養に添加したところ、破骨細胞様細胞の形成が阻害された。以上から、NB-19細胞の骨転移の形成には炎症性サイトカインの産生、RANKL発現増強を介する破骨細胞性骨融解が寄与すると考えられた。

In solid form small where の swollen sores の で, 脳 swollen sores に い で high frequency の い god 経 bud cells swollen は し ば し ば bone に planning moving し, bone planning を have す る cases after は to bad で あ る. This study で は, god 経 bud cells swollen の bone is planning to move の メ カ ニ ズ ム を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て, ヌ ー ド マ ウ ス subcutaneous へ の transplant be 験 に よ り bone, bone marrow へ の move planning can have す を る ヒ ト god 経 bud cells swollen cell lines を sentaku し た. そ の results, god 経 bud cells swollen cell lines NB - 19 が ヌ ー ド マ ウ ス へ の transplantation に よ り bone, bone marrow に planning move し う る こ と を X line piece of shadow, the PCR - -based micrometastasis assay に よ り confirm し た. そ こ で, NB - 19 cells と host cell と の bone marrow bureau に お け る interaction を beg す 検 る purpose で, NB - 19 cells と マ ウ ス bone marrow cells と の coexistence line cultivate を っ た と こ ろ, tartrate resistant acid フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ positive で multi-core の osteoclast others in cell が form さ れ た. こ の こ と は, NB - 19 と bone marrow cells と の coexist under cultivation で は osteoclast induced に の masato わ る サ イ ト カ イ ン の 発 now が raised す る こ と に よ る の で は な い か と え, rt-pcr test に よ る parsing line を っ た と こ ろ, coexistence cultivation に お い て は bone marrow cells の 単 alone cultivate と compare し て IL - 1 alpha, cycloox ygenase-2(COX-2), RANKL(ReceptorActivator of Nuclear Factor κB Ligand) が increased て た た. RANKL は osteoclast formation に お い て key と な る サ イ ト カ イ ン で あ り, IL - 1 alpha や プ ロ ス タ グ ラ ン ジ ン は RANKL の factor で あ る. こ れ ら の results か ら, god 経 bud cell lines NB - 19 と bone marrow cells と の interaction に よ り, inflammatory サ イ ト カ イ ン production の が lead き こ さ れ, RANKL の 発 now raised strong を interface し を て osteoclast induced す る も の と exam え ら れ た. こ の 仮 said を さ ら に beg す 検 る た め, RANKL に す seaborne る デ コ イ by let body で あ り internality resistance against molecular と し て function す る osteoprotegerin の リ コ ン ビ ナ ン ト protein を し, NB - the 19th と bone marrow cells の coexistence cultivation に add し た と こ ろ, osteoclast の form が resistance to harm others in cells さ れ た. Above か ら, NB - 19 cells の bone planning move の formation に は inflammatory サ イ ト カ イ ン の emergence, RANKL 発 now raised strong を interface す る osteoclast bone fusion が send す る と exam え ら れ た.

项目成果

Michigami T,Ihara-Watanabe M,Yamazaki M,Ozono K: "Receptor Activator of Nuclear Factor kB Ligand(RANKL) Is a Key Molecule of Osteoclast Formation of Bone Metastasis in a Newly Developed Model of Human Neuroblastoma."Cancer Research. 61(4). 1637-1644 (2001

Michigami T、Ihara-Watanabe M、Yamazaki M、Ozono K：“核因子 kB 配体的受体激活剂 (RANKL) 是新开发的人类神经母细胞瘤模型中骨转移的破骨细胞形成的关键分子。”癌症研究。

Michigami T, Ihara-Watanabe M, Yamazaki M, Ozono K: "Receptor Activator of Nuclear Factor κB Ligand (RANKL) Is a key Molecule of Osteoclast Formation for Bone Metastasis in a Newly Developed Model of Human Neuroblastoma"Cancer Research. 61(4). 1637-1644 (

Michigami T、Ihara-Watanabe M、Yamazaki M、Ozono K：“核因子 κB 配体的受体激活剂 (RANKL) 是新开发的人类神经母细胞瘤模型中骨转移的破骨细胞形成的关键分子”癌症研究 61(4)。 ） ） 1637-1644（

Michigami T, Yamato H, Suzuki H, Nagai-Itagaki Y, Sato K, Ozono K: "Conflicting Actions of Parathyroid Hormone-Related Protein and Serum Calcium as Regulators pf 25-Hydroxyvitamin D3-1α-Hydroxylase Expression in a Nude Rat Model of Humoral Hypercalcemia o

Michigami T、Yamato H、Suzuki H、Nagai-Itagaki Y、Sato K、Ozono K：“甲状旁腺激素相关蛋白和血清钙作为裸鼠模型中 25-羟基维生素 D3-1α-羟化酶表达调节剂的冲突作用”体液性高钙血症