天疱瘡における抗原特異的B細胞の検出法並びにin vitro抗体産生系の開発

天疱疮抗原特异性B细胞检测方法及体外抗体产生系统的开发

• 批准号: 12770455
• 负责人: 角田 和之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770455/
• 关键词: 自己免疫; 自己抗体; B細胞; 天疱瘡; ELISPOT法; デスモグレイン; 細胞接着; カドヘリン

本研究では、天疱瘡における自己抗体を産生するB細胞を検出する方法を組換え天疱瘡抗原を用いたELISPOT法により確立することを目的とする。末梢血中に存在する天疱瘡抗原特異的B細胞の数が、病勢と相関するか検討し、B細胞を標的とした治療法の開発の基礎的データとする。さらに、自己抗体産生におけるT細胞、B細胞の相互作用を検討するために、in vitroにおける自己抗体産生系を構築することを目的とする。昨年度までは、尋常性天疱瘡抗原(Dsg3)に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を陽性細胞として用いて、組換えDsg3を抗原としたELISPOTによる検出系を確立した。さらに、組換えDsg3にて免疫したマウスの脾臓、リンパ節、骨髄および、末梢血から単核球を分離し、Dsg3組換え抗原蛋白を用いたELISPOT法により、各臓器中に含まれるDsg3特異的抗体を産生するB細胞の算定した。また、我々の開発した天疱瘡モデルマウスにおける抗体産生細胞をELISPOT法により検出し、経時的変化を検討した。本年度は天疱瘡患者末梢血より分離された単核球を組み換えDsg3蛋白とマイトジェンにて刺激後ELISPOT法を行うことによりメモリーDsg3特異的B細胞を検出し、in vitro抗体産生系を開発した。このin vitro抗体産生系はT・B細胞の相互作用の解析などにも有用であると考えられた。

The purpose of this study is to establish a new method for the production of pemphigus antibodies by B cells and to establish a new ELISPOT method for the production of pemphigus antigens. The presence of pemphigus antigen-specific B cells in the peripheral blood is the basis for the development of therapy. The interaction between T cells and B cells in vitro and in vivo antibody production In the past year, pemphigus vulgaris antigen (Dsg3) has been identified as a positive antigen for ELISPOT. In addition, Dsg3-specific antibodies were produced in the spleen, spleen, bone marrow, peripheral blood mononuclear cells, and Dsg3-specific antigen proteins by ELISPOT method. The ELISPOT method is used to detect and detect the changes in antibody-producing cells in patients with pemphigus. This year, Dsg3 protein was isolated from peripheral blood of pemphigus patients and ELISPOT method was used to detect Dsg3-specific B cells. This in vitro antibody production system is useful for the analysis of T and B cell interactions.

项目成果

Amagai M., Tsunoda K., Suzuki H., Nishifuji K., Koyasu, S., Nishikawa T.: "Use of autoantigen knockout mice to develop an active autoimmune disease model of pemphigus"J Clin Invest. 105. 625-631 (2000)

Amagai M.、Tsunoda K.、Suzuki H.、Nishifuji K.、Koyasu, S.、Nishikawa T.：“使用自身抗原敲除小鼠开发活动性天疱疮自身免疫性疾病模型”J Clin Invest。

Tsunoda K, Ota T, Suzuki H, Ohyama M, Nagai T, Nishikawa T, Koyasu S, Amagai M: "Pathogenic autoantibody production requires loss of tolerance against desmoglein 3 in both T and B cells in experimental pemphigus vulgaris"Eur J Immunol. 32. 627-633 (2002)

Tsunoda K、Ota T、Suzuki H、Ohyama M、Nagai T、Nishikawa T、Koyasu S、Amagai M：“致病性自身抗体的产生需要在实验性寻常型天疱疮的 T 细胞和 B 细胞中丧失对桥粒芯糖蛋白 3 的耐受性”Eur J Nutrition。

Nishifuji K,Amagai M,Kuwana M,Iwasaki T,Nishikawa T: "Detection of antigen-specific B cells in patients with pemphigus vulgaris by enzyme-linked immunospot (ELISPOT) Assay : requirement of T cell collaboration for autoantibody production."J Invest Dermato

Nishifuji K、Amagai M、Kuwana M、Iwasaki T、Nishikawa T：“通过酶联免疫斑点 (ELISPOT) 检测寻常型天疱疮患者的抗原特异性 B 细胞：自身抗体生产中 T 细胞协作的要求。”J Invest

Nishifuji K, Amagai M, Kuwana M, Iwasaki T, Nishikawa T: "Detection of antigen-specific B cells in patients with pemphigus vulgaris by enzyme-linked immunospot (ELISPOT) Assay : requirement of T cell collaboration for autoantibody production"J Invest Derm

Nishifuji K、Amagai M、Kuwana M、Iwasaki T、Nishikawa T：“通过酶联免疫斑点 (ELISPOT) 检测寻常型天疱疮患者的抗原特异性 B 细胞：自身抗体产生所需的 T 细胞协作”J Invest Derm

Hata Y,Fujii Y,Tsunoda K,Amagai M: "Production of the entire extracellular domain of BP180 (type XVII collagen) by baculovirus expression."J Dermatol Sci. 23. 183-190 (2000)

Hata Y、Fujii Y、Tsunoda K、Amagai M：“通过杆状病毒表达生产 BP180（XVII 型胶原）的整个胞外结构域。”J Dermatol Sci。