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マクロファージの細胞内コレステロール転送に伴うACAT-1細胞内局在変化の解析

巨噬细胞中与细胞内胆固醇转移相关的 ACAT-1 细胞内定位变化分析

基本信息

批准号：
12770637
负责人：
坂下直実
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770637/
关键词：
ACAT 小胞(vesicle)免疫電顕マクロファージコレステロール泡沫化

项目摘要

ヒト末梢血単球由来マクロファージの泡沫化におけるアシルコエンザイムA:コレステロールアシルトランスフェラーゼ-1(ACAT-1)の細胞内局在の変化を超微形態レベルにて検討した。培養ヒトマクロファージをアセチル化低密度リポ蛋白(LDL)にて48時間処理すると、細胞の泡沫化とともに本来小胞体に存在するACAT-1が小胞体に由来する小胞構造(vesicle)に移行した。ACAT-1は細胞内に過剰に存在するコレステロールをエステル化することによって、コレステロールの毒性から細胞を保護し、細胞内コレステロールホメオステーシスを維持している。したがって過剰量のコレステロール負荷に伴って出現するACAT-1陽性小胞は、細胞内コレステロール濃度の上昇に伴って、ACAT-1の基質であるコレステロールとACAT-1の接触性(accessibility)を亢進させ、効率的に過剰な細胞内コレステロールをエステル化して細胞内コレステロール濃度を低減させていると考えられる。マクロファージ泡沫化に伴うACAT-1陽性小胞はヒトマクロファージのみならずマウス腹腔マクロファージにおいても同定できた。また、アセチル化LDLにて処理したマウス腹腔マクロファージは、小胞体からゴルジ体への細胞内輸送小胞の形成を阻害するブレフェルディンAの存在下においても泡沫化した。このことより、過剰の細胞内コレステロール負荷によって生じるACAT-1陽性小胞出現は小胞体→ゴルジ体への小胞輸送経路とは異なったメカニズムにより制御されていると考えられた。ACAT1陽性小胞の形成機構の解析を行うために、ACAT活性を持たない変異Chinese Hamster Ovary細胞株(AC29)にヒトACAT1遺伝子を導入し、ACAT1過剰発現CHO細胞株(His ACAT1-CHO)を樹立した。生化学的解析の結果、His ACAT1-CHOは通常培養環境下において大量のコレステロールエステルを蓄積する細胞泡沫化のモデル細胞株であることが判明した。今後、この細胞株を用いてACAT1陽性小胞形成機構を解析する予定である。

Origin of ヒトPeripheral Blood Ball: マクロファージのFoaming におけるアシルコエンザイムA:コレステロールアシThe intracellular localization of ACAT-1 is an ultramicroscopic morphology. Cultured ヒトマクロファージをアセチルLow-density リポprotein (LDL) was processed for 48 hours and the cells were foamed The original existence of vesicles and the origin of vesicles of ACAT-1 are the migration of vesicles. The existence of ACAT-1 in the cell has been confirmed. Toxicity, cell protection, and intracellular maintenance. The appearance of ACAT-1 positive cells and cells due to the excessive load caused by excessive load The concentration of the inner tube is increased, and the ACAT-1 matrix is AC. The accessibility of AT-1 is enhanced, and the efficiency is improved through the intracellular environment. The concentration of レステロールをエステル化して intracellular コレステロール is reduced by the させていると卡えられる.マクロファージFoaming ACAT-1 positive cellsァージのみならずマウス abdominal cavity マクロファージにおいても同定できた.また, アセチル化LDLにてtreatment したマウス abdominal cavity マクロファージは, small cell body からゴルジ体It prevents the formation of intracellular transport cells and prevents the formation of foam in the presence of するブレフェルディンA.このことより、through the intracellular コレステロール load によって生じるACAT-1 positive cells appeared はsmall Cell body→ゴルジ体へのsmall cell transports the 経路とはdifferent なったメカニズムによりcontrol the されていると卡えられた. Analysis of the formation mechanism of ACAT1-positive cells, ACAT activity in the Chinese Hamster Ovary cell line (AC29), ACAT1 in the CHO cell line (His ACAT1-CHO) is established. Biochemical analysis results, His ACAT1-CHO is a cell strain that accumulates a large amount of cells under normal culture conditions and foams them. From now on, the cell line will be determined based on the analysis of the ACAT1-positive cell formation mechanism.