肝切除に対するES細胞を用いた特異的細胞移植の一考案

使用 ES 细胞进行肝切除的特定细胞移植的想法

• 批准号: 12770669
• 负责人: 菅野 雄介
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770669/
• 关键词: Embryonic stem cell; Hepatocyte Growth Factor

臓器移植に対して新たな移植概念が必要とされている。現在,胚性幹細胞Embryonic stem cell(以下ES細胞)を用いて、新たな移植細胞(臓器)をin vitroで作製しようとする研究がなされている。ES細胞とは哺乳類の受精卵,胚盤胞の内部細胞塊から樹立された細胞で,一個体を形成する全ての細胞になる能力を持った細胞である,この細胞に肝細胞成長促成因子(Hepatocyte Growth Factor以下HGF)を導入し一定期間培養した後、マウスの切除後の残存肝に移植する。この細胞が増殖,分化し,肝細胞になり得れば、肝移植の分野に新たな方法を堤示できると考える。Rat HCF cDNAを含むplasmidを大阪大学医学部附属バイオメディカル教育研究センター腫瘍生化学研究部,中村敏一先生の許可をいただいた後,理化学研究所ジーンバンクDNA開発銀行より入手し,大腸菌DH5αに導入する.QIACEN Plasid MAXI kitで大量に作成、精製する。塩基配列を確認し、適切な制限酵素サイトを検索し以下のプラスミドに結合させる。FLAG配列のマーカー配列を含み、哺乳類細胞内で強力に発現するプロモーターを持つプラスミドDNA(CMV-Flag等)を購入する。上記で作成したHGF cDNAをマーカー配列と蛋白がFusion出来るようにFrameを合わせてRapid Ligation Kit(Boehring社)を用い結合させる。大腸菌DH5αに導入し、LB培地で培養し、Magic miniprep kit(Wizard社)でDNAを抽出し、正しい方向の大腸菌クローンをQIAGEN Plasid MAXI kitで大量に作成、精製する。現在、多少変更を加えてこの導入遺伝子を作製中である。

A new concept of migration is needed for migration. Embryonic stem cells (hereinafter ES cells) are currently being used in vitro and new transplanted cells are being studied. ES cells are cultured for a certain period of time and transplanted into the remaining liver after the embryo is removed. The proliferation and differentiation of these cells, the development of liver cells, the differentiation of liver transplantation and new methods are shown in this paper. Rat HCF cDNA contains plasmid. QIACEN Plasid MAXI kit was prepared and purified in large quantities by the Institute of Physical Chemistry and Chemistry after approval from Toshiichi Nakamura, Faculty of Medicine, Osaka University. The base sequence is confirmed, and the appropriate restriction enzyme is selected. FLAG alignment includes strong expression in mammalian cells and the purchase of DNA (CMV-Flag, etc.) HGF cDNA was created and used in the Rapid Ligation Kit (Boehring) Escherichia coli DH5 α introduction, LB culture, Magic miniprep kit (Wizard), DNA extraction, positive orientation of Escherichia coli, QIAGEN Plasid MAXI kit, mass production, purification. Now, how many more