大腸癌モデルマウスを用いた遺伝子治療の基礎実験

结肠癌模型小鼠基因治疗基础实验

• 批准号: 10770636
• 负责人: 菅野 雄介
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770636/
• 关键词: 大腸癌モデルマウス; 遺伝子治療; Min mouse; APC遺伝子; 大腸腺腫; Adeno Virus; 肝細胞成長促成因子HCG; Cre; loxP system; 切除後肝再生補助

APC遺伝子のexon 1から14までの約2キロベースをmRNAからRT PCRで増幅する。正常マウスの腸管からIso-gen kitを用いてmRNAを抽出し、逆転写酵素でcDNAを作製する。exon 1から14に特異的な塩基配列にSubcloningしやすい様に制限酵素のsiteを付加したPCRプライマーを作成し、GeneAmp Kitを用いてPCRを行ない正常マウスAPC遺伝子exon 1〜14を増幅する。pCMV-Flag Plasmid にレポーター遺伝子Flag 蛋白とAPC遺伝子が接合するようにSubcloningする。同時にexon 15に特異的なPCRプライマーを作成し、exon 15を増幅し、上記のPlasmidに結合し、APC遺伝子8535ベース全長を構築する。Adeno Virus Expression kitを用いて、Flag-APC遺伝子をコスミドベクターに導入する。Cre遺伝子を組み込んだコスミドベクターと制限酵素処理済みDNA-TPCとを293細胞にco-transfectにより導入し、相同組換えを起こし非増殖型の組換えアデノウイルスを得る。現在、再考を加えつつ導入遺伝子を作製中である。

APC gene exon 1, 14, and about 2 minutes later, mRNA expression increased by RT PCR. Normal gut enzymes are produced using Iso-gen kits, mRNA extraction, and reverse transcription enzymes. Exon 1:14 Specific DNA Sequence Subcloning: 14 Restriction Enzyme Site Amplification: PCR Creation: GeneAmp Kit PCR Execution: Normal: APC Sequence Amplification: 1 ~ 14 pCMV-Flag Plasmid Subcloning At the same time, exon15 specific PCR amplification, exon15 amplification, the above Plasmid binding, APC gene 8535 length construction Adeno Virus Expression Kit for use, Flag-APC gene for introduction Cre gene expression system is composed of the following components: DNA, TPC, 293 cells, co-transfection, same component transformation, non-genetic component transformation, restriction enzyme treatment, etc. Now, re-examine