IP3レセプターによる未熟心筋機能評価法の開発

开发利用IP3受体评估未成熟心肌功能的方法

• 批准号: 12770730
• 负责人: 長堀 隆一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770730/
• 关键词: IP3 receptor gene; Ca-ion second messenger; In situ hybridization; 心筋細胞; 分化成長; IP_3 Receptor; Ca second messenger

新生児手術では、心臓の未熟さの度合いの把握や、未熟心筋細胞としての能力を見極めることが重要である。心筋の興奮収縮連関に関与するイノシトール三燐酸(IP3)のレセプター(筋小胞体の膜上に存在する)の遺伝子が、マウス未熟心筋においてどのような発現様式をとり、心筋細胞自体の未熟度との関連を明らかにすることを目的とした。IP3レセプター遺伝子の発現に関しては、心筋において発現することが93年にM.C.Moschellaらにより報告。同年、刺激伝導系に、より多く発現されている事をL.Gorzaらが報告した。我々はまず、心筋の発達段階におけるIP3レセプター遺伝子の発現様式の検討のため、Type IのIP3 ReceptorのcDNAを鋳型としたRNAプローブの作製を行った。さらに、日令ごとの胎生期のマウス組織と、日令ごとの新生児マウスを材料とし、その心臓と小脳(ポジティブコントロール)を摘出し、4%パラホルムアルデヒド固定、パラフィン包埋を行い、5μmの厚さの切片を作製した。これらに対し、免疫組織化学、RNAに対してのIn situ hybridizationを行い、12日令〜16日令の胎児マウスと生後0〜7日までの新生児マウスの標本における結果で、ポジティブコントロールの小脳では、成長とともに陽性率が上昇した。これに対し、心筋では胎児期のより若い心筋細胞での陽性率が高くなる傾向が認められた。作製したRNAプローブによるIn situ hybridizationをヒト組織に応用するための固定や反応時間等の条件設定の検討実験を行った。マウス組織とほぼ同様の条件設定でその陽性細胞の検出が確認された。現段階で、ヒト組織の症例数はn=2であり、その両者において心筋での陽性細胞は確認された。現在、症例数の上積みと発現量の定量化の検討を進めている。

The importance of neonatal surgery, the immaturity of the heart, the degree of integration, and the ability of immature cardiomyocytes are extremely important. The excitement and contraction of the heart muscles are related to the existence of the muscle on the membrane of the muscle cell body,マウス unripe heart muscle, thin heart muscle, thin heart muscle The immaturity of the cell itself and the relationship between it and the purpose of it are the same. IP3 レセプター缝子の発appears に关しては, 心素において発appears することが93年にM.C.Moschella らにより report. In the same year, I stimulated the directing system and reported on L.Gorza's story. Type I IP3 Type I IP3 ReceptorのcDNAを鋳TypeとしたRNAプローブの成を行った.さらに, 日令ごとのviviparous period のマウスorganizationと, 日令ごとの生児マウスを Material とし, その心臓と小脳(ポジティブコントロール) extraction, 4% パラホルムアルデヒド fixed, パラフィン embedded を row, 5μm thick slicing and production.これらに対し, immunohistochemistry, RNA に対してのIn situ Hybridizationを行い, 12th day order ~ 16th day order の児マウスと 0~7 days after birth までの生児The result of the specimen of the maize specimen, the positive rate of the growth test, and the positive rate of the growth test have increased.これに対し、cardiovascular ではFetal stage のよりIf いcardiovascular cells でのpositive rate がHigh くなる tend to recognize められた. The production of RNA RNA is done in situ hybridization and the organization of the RNA is fixed and the reaction time and other conditions are set. The conditions of the same tissue are set and the positive cells are confirmed. At this stage, the number of symptomatic cases in the tissue is n=2, and the number of positive cells in the heart muscle of the patient is confirmed. Now, the number of cases has been accumulated and the quantity has been quantified.