AMPA型グルタミン酸受容体に対する麻酔薬の効果

麻醉药对 AMPA 型谷氨酸受体的影响

基本信息

批准号：
12770807
负责人：
須藤亮
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

グルタミン酸受容体チャネルは中枢神経系の主要な興奮性シナプス伝達を担う受容体であるばかりでなく,脳虚血,低酸素脳症,ニューロパシックペインとも密接なつながりがあることが知られている.このうちAMPA型は,従来から報告されている非カルシウム透過性の受容体のほかに高いカルシウム透過性を持つ受容体が存在することが近年明らかとなっている.筆者はAMPA受容体の4種類のサブユニット(GluR1, GluR2, GluR3, GluR4)をコードするcDNAを組み込んだアデノウィルスベクターを作製し(Molecular Brain Research 50 ; 91-99, 1997に論文発表),ラット褐色細胞腫由来の細胞株であるPC12細胞に感染させることにより機能的受容体を発現させ,ホールセルパッチクランプ法により麻酔作用を持つキセノンがAMPA型グルタミン酸受容体にどのような効果を及ぼしているか,電気生理学的に解明を試みた.組み換えアデノウィルスベクターをPC12細胞に感染させ,2日間インキュベートした細胞にパッチ電極をアプローチしAMPA受容体のアゴニストであるAMPAを投与し,ホールセルパッチクランプ法を用いてその電気生理学的応答を記録した.このとき細胞外液中にキセノンをバブリングすることにより還流投与しAMPA受容体応答に与える効果を記録解析した.キセノン投与は,カルシウム透過性及びカルシウム非透過性AMPA型受容体応答の双方に対して影響を与えないことが確認された.さらに,NMDA型グルタミン酸受容体チャネルについても同様の手法を用いてキセノン投与による効果を検討した.NMDA型受容体のサブユニットであるNR1とNR2Bを共発現させた細胞において,キセノンはNMDA受容体応答を70%抑制することが判明した.

谷氨酸受体通道不仅是负责中枢神经系统主要兴奋性突触传播的受体，而且还与脑缺血，低氧性脑病和神经性疼痛有着密切的联系。其中，最近已经揭示了AMPA类型，除了先前报道的非钙渗透受体外，还有高度可钙的受体。作者创建了一个腺病毒载体，该腺病毒载体结合了编码AMPA受体四个亚基（Glur1，Glur2，Glur3，Glur4）（分子脑研究50; 91-99）的cDNA。（发表于1997年），使用大鼠嗜铬细胞瘤衍生的细胞系来表达功能受体，并使用整个细胞贴片夹方法来解释Xenon的作用，Xenon对AMPA型谷氨酸受体具有麻醉作用。重组腺病毒载体被PC12细胞感染，并用贴片电极接近孵育2天的细胞，以施用AMPA的AMPA，AMPA受体的激动剂，并使用整个细胞斑块夹方法记录电生理反应。目前，记录并分析了在细胞外流体中给予回流氙的作用。已证实，XENON给药对钙的渗透性和钙不渗透AMPA受体反应没有影响。此外，使用类似的NMDA型谷氨酸受体通道的技术研究了XENON给药的效果。发现XENON给药在共表达NR1和NR2B的细胞中抑制了70％的NMDA型受体反应，NMDA型受体的亚基。