卵胞刺激ホルモン受容体遺伝子導入顆粒膜細胞との共培養による未熟卵子の成熟化

与促卵泡激素受体基因转染的颗粒细胞共培养使未成熟卵母细胞成熟

• 批准号: 12770903
• 负责人: 藤田 和之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770903/
• 关键词: 顆粒膜細胞; FSH受容体; 遺伝子治療; アデノウイルスベクター; 未熟卵子

diethylstilbestrolにて刺激した幼若雌ラット卵巣より穎粒膜細胞を採取、経時的に1251-FSHを用いたbinding assay法によるFSH受容体数およびFSH刺激によるE2産生能を測定した。一方、ヒトFSH受容体遺伝子をアデノウイルスに組み込んだ組換えアデノウイルス(Ad-FSHR)を作成、培養1日目から4日目までにMOI10にて穎粒膜細胞に導入し、その2日後に同様にFSH受容体数、E2産生能を測定した。125I-FSHのFSH受容体への特異的結合量は培養0日目は845cpmであり、FSH刺激によりE2が2929pg/ml産生された。3日目の125I-FSH結合量は157cpmで、E2産生量も192pg/mlと減少し、5日目では結合量は155cpm、E2産生は99pg/mlであった。一方、Ad-FSHR導入穎粒膜細胞では、1日目導入では1251-FSH結合量が426cpm、E2産生は5940pg/mlと未導入細胞と比較して有意に増加していたが、培養3日目導入では結合量が262cpmと未導入細胞と有意な差が認められず、E2産生量も1010pg/mlと培養0日目より減少していた。よってFSH受容体遺伝子の穎粒膜細胞への導入は、培養1、2日目では受容体数の増加やFSH刺激に対する細胞反応性の増強が得られたが、培養3日目以降では有意な効果が得られなかったことから、培養初期でのFSH受容体の遺伝子導入が適切であると考えられた。

Diethylstilbestrol stimulated the growth of young females and stimulated the production of E2 by 1251-FSH binding assay. In addition, FSH receptor gene was prepared and cultured for 1 day, 4 days, MOI10 and E2 production was measured. The specific binding of 125I-FSH to FSH receptor was 845cpm on day 0 of culture and 2929pg/ml on FSH stimulation. 3 days of I-FSH binding was 157cpm, E2 production was 192pg/ml, 5 days of I-FSH binding was 155cpm, E2 production was 99pg/ml. Ad-FSHR was introduced into granulosa cells at day 1, the amount of FSH binding was 426cpm, the amount of E2 production was 5940pg/ml, and the amount of FSH binding was 262cpm, and the amount of E2 production was 1010pg/ml. The number of FSH receptors increased after 1 or 2 days of culture, and the response to FSH stimulation increased after 3 days of culture.