スフィンゴミエリナーゼ阻害剤をバイオプローブとした細胞機能の解析

使用鞘磷脂酶抑制剂作为生物探针分析细胞功能

• 批准号: 12780444
• 负责人: 荒井 雅吉
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Kitasato University (2001)Kitasato Institute (2000)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780444/
• 关键词: スフィンゴミエリナーゼ; 阻害剤; バイオプローブ; 微生物; 二次代謝産物; スフィゴミエリナーゼ

平成13年度は、酵素アッセイによる中性および酸性スフィンゴミエリナーゼ(SM)阻害剤の探索を継続するとともに、ヒトTリンパ球系癌細胞であるJurkat細胞を用いて、中性SM特異的阻害物質として見い出されたchlorogentisylquinoneの細胞レベルでめSM阻害作用を評価した。土壌などから分離した放線菌、糸状菌およびバクテリアの培養液を対家に約3000サンプルについてスクリーニングを行った。その結果、一糸状菌、FO-7436株より抗生物質として報告されているalutenusinが選択された。本化合物は中性SMに対して、IC50値で41.3μMを示し、酸性SMに対しては、350μMまで阻害活性を示さなかった。またこの阻害活性は非可逆的な阻害であることが示唆された。しかしながら今回のスクリーニングでは酸性SMを特異的に阻害する化合物は得られなかった。一方、chlorogentisylquinoneをバイオプローブとし、SMを介するシグナル伝達の解明を行うことを目的に、Jurkat細胞を用いた細胞評価系を構築した。本年度はまずchlorogentisylquinoneのJurkat細胞に対する細胞毒性およびSM阻害活性を検討した。MTT法により、薬剤添加から20時間後の細胞毒性を評価したところ、chlorogentisylquinoneは50μMまで細胞毒性を示さなかった。しかしSM阻害活性を測定したところ、30μMまではSMの活性を阻害できなかった。chlorogentisylquinoneは中性SMに特異的であることから、現在、より特異性の高い細胞評価系を構築中である。

In 2013, the study of inhibitors of enzyme activity, neutral and acidic substances, and the evaluation of the inhibitory effect of SM on Jurkat cells were carried out. About 3000 pieces of culture medium were prepared for isolation of radioactive bacteria, bacteria and bacteria. The results showed that one strain of FO-7436 was isolated from the other strain of FO-7436, and the other strain was isolated from the other strain of FO-7436. The compound showed inhibitory activity against neutral SM and IC50 values of 41.3μM and acidic SM and IC50 values of 350μM. The resistance activity is irreversible. A compound that is specifically resistant to acid SM is available. A cell evaluation system was constructed using chlorogenic quinone as a medium. This year, the cytotoxicity and SM inhibition activity of chlorogentisylquinoline on Jurkat cells were investigated. The cytotoxicity was evaluated by MTT method 20 times after the addition of the drug, and the cytotoxicity of chlorogentisylquinone at 50μM was shown. The activity of SM was measured at 30μM. Chlorogentisylquinone is neutral, specific, and high in cell evaluation.

项目成果

Uchida, R.: "Chlorogentisylquinone, a new neutral sphingomyelinase inhibitor, produced by a marine fungus"Journal of Antibiotics. 54. 882-889 (2001)

Uchida, R.：“氯原基醌，一种新型中性鞘磷脂酶抑制剂，由海洋真菌产生”抗生素杂志。

Yamaguchi, Y.: "Phoma sp. FOM-8108, a producer of gentisylquinones, isolated from sea sand"Mycoscience. (in press). (2002)

Yamaguchi, Y.：“Phoma sp. FOM-8108，一种龙胆基醌的生产者，从海沙中分离出来”Mycoscience。