大麻ポリケタイド合成酵素の構造機能研究

大麻聚酮合酶的结构与功能研究

基本信息

批准号：
12780441
负责人：
田浦太志
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780441/
关键词：
大麻ポリケタイド cDNA クローニング olivetolic acid ポリケタイド合成酵素

项目摘要

大麻ポリケタイド合成酵素(OLAS)のcDNAクローニング研究代表者は平成12年度に新規ポリケタイド合成酵素PKS1のcDNAクローニングに成功した。しかしながら大腸菌サイトゾルで発現させた組み換えPKS1は大麻成分のolivetolic acidではなく、その脱炭酸体のolivetolを合成した。この原因として発現システムが不適切であった可能性を考え、本年度は種々の発現システム(大腸菌ペリプラズム、酵母、植物発現系など)を用いて組み換え酵素を調製した。この結果、ペリプラズムで発現したPKS1が効率良くolivetolic acidを合成することを確認し、PKS1をolivetolic acid合成酵素(OLAS)と命名した。本酵素がサイトゾルとペリプラズムで異なる活性を示した原因については現在検討を行っている。OLASの構造機能研究OLASの構造機能研究を行うに当たり、X線解析を行うに十分な量の組み換え酵素が得られなかったため、モデリングにより立体構造の推定を行った。すべての植物ポリケタイド合成酵素に保存された数個のアミノ酸残基がOLASの活性部位と推定される領域に保存されていたことから、これらに点変異を導入してアッセイを行い、これらがOLASの反応にも重要な役割を果たすことを確認した。現在はOLASの活性部位のみに特徴的なアミノ酸への点変異導入を検討しており、これにより反応の特徴を決定するアミノ酸残基を決定する予定である。

大麻聚酮化合酶合酶（OLAS）的cDNA克隆主要研究者在2000年成功克隆了新型的聚酮化合物合酶PKS1。但是，在大肠杆菌胞质溶胶中表达的重组PKS1并非大麻含量，不是大麻成分，橄榄酸，而是脱羧酸含量的脱羧酸含量的脱羧酸含量。考虑到表达系统不合适的可能性，今年使用各种表达系统（大肠杆菌Periplasm，酵母，植物表达系统等）制备了重组酶。结果，已经证实在周期张中表达的PKS1有效合成橄榄酸，PKS1被称为橄榄酸合酶（OLAS）。目前正在研究这种酶在细胞质和周质中表现出不同活性的原因。 OLA在进行OLA的结构功能研究中的结构功能研究，我们没有获得足够量的重组酶进行X射线分析，因此我们通过建模估计了三维结构。在所有植物聚酮化合物合酶中保守的几个氨基酸残基在假定是OLA的活性位点的区域中均保守，我们通过将点突变引入这些分析并确认这些在OLAS反应中也起着重要作用。当前，我们正在考虑将点诱变引入仅在OLA的活性位点具有特征性的氨基酸，我们计划确定确定反应特征的氨基酸残基。