癌の遺伝子治療用Epstein-Barrウイルスベクター開発の基礎的研究。

用于癌症基因治疗的 Epstein-Barr 病毒载体开发的基础研究。

• 批准号: 12877292
• 负责人: 小林 家吉
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12877292/
• 关键词: 口腔癌; 重層扁平上皮癌; Epstein-Barrウイルス; polymerase chain reaction (PCR); southern blotting; ウイルスベクター; 遺伝子治療; アポトーシス; 胃癌; polymerase chain reaction(PCR); エレクトロポレーション; 扁平上皮癌; Epstein-Barrウイルス(EBV); polymerase chin reaction(PCR); 相同組換え; エレクトポレーション; G

1.口腔癌培養細胞株における野生型Epstein-Barrウイルス(wEBV)の遺伝子発現パターンの検索:昨年度の実績報告書に記述したように、EBV感染細胞をクローニングするには、antibiotic resistance geneを組み込んだEBVベクターをこの感染実験系に使用する事が最も効率よくクローニングできる方法である。しかしながら、組換えEBV(rEBV)(ジイオセーフティーレベル3)に対する封じ込め施設が稼動していないため、rEBVからwEBV(バイオセーフティーレベル2)へ実験対象を変更せざる負えなかった。そこで、口腔癌培養細胞(sMISK、MISK81-5、HSC-3)あるいは胃癌培養細胞(MKN74)とEBV産生Bリンパ培養細胞(AKATA細胞)との共培養法を用いて、wEBVを上皮細胞に感染させた後、EBV感染上皮細胞をクローニングする目的で限界希釈法を施行した。その結果、wEBV陽性クローニング細胞をsMISK 50クローン中15(30%)クローンに認めた。MISK81-5では24クローン(58.6%)に、MKN74は21クローン(87.5%)およびHSC3には17クローン(73.9%)であった。In vitroにおける従来の報告のEBV感染効率に比較して、我々の感染実験系では高頻度にwEBV陽性クローニング細胞を得る事ができた。また、現在の所、口腔癌細胞株におけるEBV陽性細胞のクローニングに成功した報告がなく、我々のこの報告が最初である。このクローニング細胞を使用して、口腔癌におけるEBVの潜伏感染様式を検索の後、ウイルス蛋白による口腔癌のアポトーシス変化機構を検索する。2.EBV感染による口腔癌細胞のアポトーシス機構変化の検索:今後、DNA microarray法を用いて、EBV感染による口腔癌細胞の遺伝子発現の変化を網羅的に検索し、感染後に高発現しているアポトーシス関連遺伝子を捉える。同様に、潜伏期に発現しているEBVDNAを強制発現系を用いてアポトーシス関連遺伝子の発現を検索し、アポトーシス誘導に対する責任EBV遺伝子を決定する。決定後、EBV産生蛋白とアポトーシス関連蛋白の相互作用をBinding assay系で明らかにしていく。

1. The oral cancer cell line was infected with wild-type Epstein-Barr virus (wEBV). The results were as follows: last year, the cell culture of oral cancer cell line, wild-type EBV infection, antibiotic resistance gene infection, infection and infection. The information system, EBV (rEBV) (system information system), and so on, is related to the operation of the field operation, such as the operation of the farm, the wEBV, the wEBV, and the improvement of the performance. Oral cancer cell culture (sMISK, MISK81-5, HSC-3), gastric cancer cell culture (MKN74), EBV cell culture, B cell culture (AKATA cell), co-culture method (co-culture), EBV infection epithelial cell infection, EBV infection epithelial cell infection, EBV infection epithelial cell culture, EBV infection epithelial cell culture, oral cancer cell culture, EBV infection, oral cancer cell culture, oral cancer cell culture The results showed that 15% (30%) of the sMISK 50 cells were affected by wEBV. MISK81-5 (58.6%), MKN74 (87.5%), HSC3 (73.9%). In vitro told me to report that the rate of EBV infection was higher than that of others, and that we had a high degree of wEBV infection. The oral cancer cell line, the EBV cell line, the oral cancer cell line and the oral cancer cell line. After the use of antitumor, oral cancer, EBV, latent infection, oral cancer, oral cancer and oral cancer. In the future, 2.EBV-infected oral cancer cells were detected by DNA microarray, EBV-infected oral cancer cells were screened by the Internet, and after infection, high-risk oral cancer cells were detected after infection. In the same period and during the incubation period, it is necessary to use the EBV system to make the decision of the EBV system. After the decision was made, EBV protein interaction between protein and protein was detected in the Binding assay system.

项目成果

Tamotsu Kiyoshima et al.: "Expression of p53 tumor suppressor gene in adenoid cystic and mucoepidermoid carcinomas of the salivary glands"Oral Oncology. 37・3. 111-118 (2001)

Tamotsu Kiyoshima 等：“唾液腺腺样囊性癌和粘液表皮样癌中 p53 肿瘤抑制基因的表达”口腔肿瘤学 37・3（2001）。

Tamotsu Kiyoshima et al.: "An L1 element disrupts human bone sialoprotein promoter : lack of tissue-specific regulation by distalless5 (Dlx5)and runt homeodomain protein2 (Runx2)/core binding factor a1(Cbfa1)elements"Gene. 299. 205-217 (2002)

Tamotsu Kiyoshima 等人：“L1 元件破坏人骨唾液蛋白启动子：缺乏远端 5 (Dlx5) 和 runt 同源域蛋白 2 (Runx2)/核心结合因子 a1 (Cbfa1) 元件的组织特异性调节”基因。

Hideyuki Goto et al.: "Expression of cyclin D1 and GSK-3beta and their predictive value of prognosis in squamous cell carcinomas of the tongue"Oral Oncology. 31・6. 549-556 (2002)

Hideyuki Goto 等：“舌鳞状细胞癌中细胞周期蛋白 D1 和 GSK-3β 的表达及其预后预测价值”口腔肿瘤学 31・6（2002）。

Kaori Shima et al.: "Incidence of human papillomavirus 16 and 18 infection and p53 mutation in patients with oral squamous cell carcinoma in Japan."Mol.Cell Biol. 38・5. 445-450 (2000)

Kaori Shima 等：“日本口腔鳞状细胞癌患者中人乳头瘤病毒 16 和 18 感染和 p53 突变的发生率”。Mol.Cell Biol. 38・5 (2000)。

Hiroko Wada et al.: "Expression of heat shock proteins, Hsj2, Hsc73 and Hsp86 during the morphogenesis of the mouse lower first molar"The Histochemical Journal. 34・3-4. 105-109 (2002)

Hiroko Wada 等：“小鼠下第一磨牙形态发生过程中热休克蛋白、Hsj2、Hsc73 和 Hsp86 的表达”组织化学杂志 34·3-4（2002）。