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網膜色素上皮細胞への遺伝子導入による網膜再生関連分子の機能評価法の確立

通过将基因导入视网膜色素上皮细胞来评价视网膜再生相关分子的功能的方法的建立

基本信息

批准号：
12878150
负责人：
千葉親文
金额：
$ 1.41万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類の眼形成遺伝子として知られているPax-6、Chx10、MITFがイモリの網膜再生過程でも発現するかどうか半定量的RT-PCR法により調べた。その結果、Pax-6とMITFは再生10日の網膜色素上皮(RPE)細胞が脱分化する時期に発現することが分かった。一方、Chx10は再生14日から発現が始まることが分かった。これらの結果から、眼球から神経網膜が除去されると、RPE細胞は直ちに脱分化し、眼胞前期に相当する細胞に変化するのではないかと考えられる。これらの細胞は活発に増殖し神経前駆細胞を生み出すと共に、RPE細胞に再分化すると考えられる。このシナリオが正しいかどうかは、今後in situハイブリダイゼーション法や免疫組織化学法により、より詳細に調べていく必要がある。RPE細胞を初期化し、発生の遺伝子プログラムを再起動する細胞内の変化は、再生開始から10日までの間に起こるものと推測される。そこで、再生0日と10日の間で発現量に差のある遺伝子をcDNAサブトラクション法により単離することを試みた。現在までに、再生10日特異的な遺伝子として182クローンを得た。相同性検索の結果、CDC10やstathminなどの細胞分裂に関わる遺伝子が確認された。このことは、再生10日の細胞がすでに分裂サイクルに入っていることを示唆している。また、102クローン(全体の56%)は、データベースにない未知の遺伝子であった。今後、それぞれのクローンの網膜再生過程における発現動態を調べる予定である。また、再生0日特異的なクローンとして約700得ている。網膜再生の開始に関わる遺伝子は正常RPE細胞で発現していなければならない。今後、これらのクローンの解析を進め、再生開始に関わる遺伝子を見つけたいと考えている。これらの遺伝子の機能は、本研究により確立した眼球内移植法により解析していく予定である。

Mammalian eye formation genes were detected by Pax-6, Chx10, MITF and semi-quantitative RT-PCR. As a result, Pax-6 and MITF regenerated retinal pigment epithelium (RPE) cells at 10 days of age. One side, Chx10, regeneration, 14 days, start to appear, start to appear, start, start to appear, start, start to appear, to appear, start, start to appear, to appear, start, to appear, start, to appear, to start, to The result is that the retina is removed from the eyeball, the RPE cells are dedifferentiated, and the precellular cells are transformed. These cells are living, developing, developing, and re-differentiating. The method of immunohistochemistry was used to analyze the changes in the expression of the protein. It is speculated that the time between the initiation and regeneration of RPE cells and the reactivation of RPE cells is 10 days. The difference in the amount of DNA between 0 and 10 days of regeneration was detected. Now, regeneration 10 days of special The results of identity detection, CDC10 and stathmin were confirmed. The cells of the 10th day of regeneration were divided into two groups.また、102クローン(全体の56%)は、データベースにない未知の遗伝子であった。In the future, the development dynamics of the retina regeneration process will be adjusted according to the predetermined conditions.また、再生0日特异的なクローンとして约700得ている。Genes related to the onset of retinal regeneration are found in normal RPE cells. From now on, the analysis of the problem will be carried out, and the regeneration will begin. This study aims to establish the method of intraocular transplantation and analyze its function.