巨大アメーバ仮足形成のリン脂質代謝による制御機構の解明

阐明磷脂代谢控制巨型变形虫形成的机制

• 批准号: 13874115
• 负责人: 園部 誠司
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13874115/
• 关键词: Amoeba proteus; 仮足; アクチン; 細胞膜; ホスホリパーゼ; リン脂質; PIP2; Ca^<2+>; アメーバプロテウス; アメーバ運動; Phospholipase C; カルシウム

動物細胞や細胞性粘菌の運動にはPIP3が重要な役割を果たしている。一方、自由生活アメーバAmoeba proteusは仮足先端の細胞膜からアクチンが一時的に解離し、細胞質がその部分に流れ込むことにより貧食や移動を行うが、イノシトールリン脂質シグナリングの役割は不明である。我々はアメーバ運動におけるホスホリパーゼC(PLC)の関与を検討した。Amoeba-proteusの細胞質画分をゲルろ過カラムにかけると分子量的200-250kの画分にPIP2却水分解活性が存在した。また生細胞の仮足形成と移動は、PLC阻害剤であるU73122の添加によって可逆的に阻害されるが、PI3キナーゼの阻害剤では効果がなかった。PIP2の動態を可視化する目的で、蛍光性プローブ:His-GFP-PLCδ-PHを大腸菌で発現させ細胞内に微量注入したところ、蛍光は主に細胞膜に局在したが仮足先端では減少していた。次に細胞内のIP3を定量したところ、静止状態では約0.5μMであったのに対し運動状態では約4μMであった。IP3を細胞内に微量注入すると仮足形成および移動速度が光進した。またこの効果は細胞外被へのEGTAの添加やthapsigargin処理で抑制された。以上より、Amoebaの細胞運動では仮足先端のPIP2がPLCにより分解されることが重要であり、仮足伸張は膜にPIP2を介して結合していたアクチシ繊維の解離によって惹起され、産生されたIP3によるCa2+動員を介したPLC活性化の正のフィードバツクにより維持されると考えられる。

Animal cells and cellular fungi movement PIP3 is an important part of the process. One side, free life, Amoeba proteus, the cell membrane at the tip of the foot, dissociates, the cytoplasm flows, the poor food moves, the lipid flows, the service is unknown. I'm sorry, but I'm sorry. Amoeba-proteus cytosol fraction was found to have a molecular weight of 200-250k, but PIP2 activity was not detected. The growth of cells and the movement of PLC inhibitor U73122 add reversible inhibitor PI3. For the purpose of visualization of PIP2 dynamics, the fluorescence profile:His-GFP-PLCδ-PH is found in E. coli cells by microinjection, and the fluorescence profile of the host cell membrane is reduced. The amount of IP3 in the cells was about 0.5μM at rest and about 4μM at motion. IP3 is injected into the cell in a micro-amount, and the formation and movement speed of the foot are increased. This effect was inhibited by EGTA addition and thapsigargin treatment. Amoeba's cell movement is mediated by the dissociation of PIP 2 from the apex of the foot and the activation of PLC by Ca2+ mobilization.