培養細胞仮足においてアクチン繊維伸長を制御する因子群の機能解析

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WASPおよびEna/VASPファミリーに属するタンパク質は、RacやCdc42などのRhoファミリー低分子量Gタンパク質ファミリーの下流で起こるアクチン細胞骨格の再編に関与していると考えられているが、その機能の詳細は不明である。そこでラメリポーデイアを伸展したラット線維芽細胞株3Y1を用いて、WASPファミリーのWAVEとN-WASPおよびEna/VASPファミリーのMenaの細胞内局在を解析した。各タンパク質の局在は間接蛍光抗体法と免疫電子顕微鏡法によって観察した。N-WASPはラメリポーディア内マイクロスパイクのアクチン繊維に添って局在したのに対し、WAVEはラメリポーディアとマイクロスパイクの先端に局在した。MenaはWAVEと相似な局在を示したが、WAVEよりもマイクロスパイクの先端に強く集積する傾向を示した。WAVEとMenaの局在を制御する機構を明らかにするために、各タンパク質の機能をドメインを細胞に発現させ、その局在を観察した。WAVEでは分子のN端側に存在するSCARホモロジードメインのみでもWAVEと同様な局在を示し、Menaでは分子のC端側に存在するEVH2ドメインがMenaと同様な局在を示した。従って、WAVEとMenaの局在にはそれぞれSCARホモロジードメインとEVH2ドメインが重要なことが明らかになった。SCARホモロジードメインとEVH2ドメインのアミノ酸配列には明らかな相同性がないことから、WAVEとMenaの局在は異なった機構によって制御されてると考えられる。