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植物根を利用した回収の容易な組み換え体タンパク質の多量安定発現系の開発

开发稳定表达大量重组蛋白的系统，该系统易于使用植物根回收

基本信息

批准号：
13876017
负责人：
高橋正昭
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

植物をタンパク質の合成工場として、外来タンパク質を根で合成させ、根の外部に分泌させたタンパク質を水耕液から回収するというアイデアで、大量発現系を構築することを目的とした。これらのシステムのテスト用として、根の表面に分泌されると推定したトマトLeGlp1のターゲットシグナルと、緑色蛍光タンパク質(GFP)およびβ-グルクロニダーゼ(GUS)融合タンパク質を根で発現するように、相当するタンパク質をコードする遺伝子をタバコに導入し形質転換した。得られた閣下は以下のようである。(1)上記の融合タンパク質が形質転換タバコの根で発現することを蛍光、および、酵素活性により確認した。(2)形質転換タバコの種子を無菌的に寒天培地上で発芽させ、伸長した根周辺の寒天のレポータータンパク質の存在を検討し、根先端部においてレポータータンパク質の婚外への分泌を認めた。(3)寒天上で生育しある程度大きくなった形質転換タバコを水耕に移し、水耕液を一定期間おきに回収して、その中のGFPおよびGUS活性を測定した。その結果、根から水耕液に分泌されるタンパク質量は、根での合成量に比較してそれほど高率ではないことが判明した。(4)根の構造を弱くする種々の処理を行い、GFPおよびGUSの根から水耕液への分泌に対する効果を検討したが、顕著に分泌量を増すような影響を与える処理を見つけることが出来なかった。

Plant をタンパク性の Synthetic Factory として, Exogenous タンパク性を Root で Synthetic させ, Root の External に Secretion させたタンパク性をhydroponic liquid からrecycling するというアイデアで, a large number of 発appearance system をconstruction することをpurpose とした.これらのシステムのテスト Use として, root surface に secretion されると presumed したトマトLeGlp1のターゲットシグナルと, green 荍光タンパク性(GFP)おGUS β-グルクロニダーゼ(GUS) fusion of GUS , quite するタンパク性をコードする伝子をタバコに imported しmorphosis転changeした. It's the following られたYour Excellency. (1) The fusion of the above-mentioned タンパク性がmorphosis転change the タバコのroot で発appears することを蛍光, および, and the enzyme activity によりconfirmation した. (2) The shape and quality of the seeds are changed, and the sterile cold weather is cultivated on the ground.ータンパク性のexistent を検question し, root tip part においてレポータータンパク性の extramarital への secretion をcognize めた. (3) The degree of fertility in the cold sky is large, and the shape and quality of the soil are changed by water cultivation and water transfer. The tillage liquid was recovered during a certain period of time, and the activity of GFP and GUS in the medium was measured. The result, the secretion of hydroponic liquid, the quality of the root, the synthesis amount of the root, the comparison of the high rate, the high rate and the clear result. (4) The structure of the roots is weak and the seeds are processed and the lines are processed, and the roots of the GUS are the roots of the hydroponic liquid and the secretion of the hydroponic liquid is The effect is the same as the amount of secretion, the amount of secretion is affected, and the treatment is the same as the treatment.