植物根を利用した回収の容易な組み換え体タンパク質の多量安定発現系の開発

开发稳定表达大量重组蛋白的系统，该系统易于使用植物根回收

基本信息

批准号：
13876017
负责人：
高橋正昭
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

植物をタンパク質の合成工場として、外来タンパク質を根で合成させ、根の外部に分泌させたタンパク質を水耕液から回収するというアイデアで、大量発現系を構築することを目的とした。これらのシステムのテスト用として、根の表面に分泌されると推定したトマトLeGlp1のターゲットシグナルと、緑色蛍光タンパク質(GFP)およびβ-グルクロニダーゼ(GUS)融合タンパク質を根で発現するように、相当するタンパク質をコードする遺伝子をタバコに導入し形質転換した。得られた閣下は以下のようである。(1)上記の融合タンパク質が形質転換タバコの根で発現することを蛍光、および、酵素活性により確認した。(2)形質転換タバコの種子を無菌的に寒天培地上で発芽させ、伸長した根周辺の寒天のレポータータンパク質の存在を検討し、根先端部においてレポータータンパク質の婚外への分泌を認めた。(3)寒天上で生育しある程度大きくなった形質転換タバコを水耕に移し、水耕液を一定期間おきに回収して、その中のGFPおよびGUS活性を測定した。その結果、根から水耕液に分泌されるタンパク質量は、根での合成量に比較してそれほど高率ではないことが判明した。(4)根の構造を弱くする種々の処理を行い、GFPおよびGUSの根から水耕液への分泌に対する効果を検討したが、顕著に分泌量を増すような影響を与える処理を見つけることが出来なかった。

目的是创建一个大规模的表达系统，其想法是将植物用作蛋白质合成工厂，将异物与根合成外蛋白，并从水培溶液中恢复在根部内分泌的蛋白质。为了测试这些系统，烟草被用来引入和转化番茄leglp1的靶信号，该信号被认为是分泌到根表面的，并将编码相应蛋白质的基因引入了烟草，以表达绿色荧光蛋白（GFP）和β-糖蛋白酶（GFP）和β-葡萄糖醛酸蛋白酶（GUS）融合蛋白。所获得的主如下：（1）通过荧光和酶活性证实了上述融合蛋白在转化的烟草的根中表达。（2）转化的烟草的种子在琼脂培养基上被无菌发芽，并研究了伸长根周围的琼脂报告基因蛋白，并在根尖端观察到了记者蛋白的婚外分泌。（3）在琼脂上生长并在某种程度上生长的转化烟草被转移到水培中，并在每一定时间段内收集水培溶液，并测量其中的GFP和GUS活性。结果，发现与根中的合成量相比，从根到水培溶液中分泌的蛋白质量不是特别高。（4）进行了各种治疗以削弱根系结构，并研究了GFP和GUS对根部对水培液的分泌的影响，但没有治疗的作用显着增加了分泌量。