海洋植物の遺伝子操作技術の確立

海洋植物基因操作技术的建立

• 批准号: 13876045
• 负责人: 三輪 泰彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Fukuyama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13876045/
• 关键词: Porphyra; phosphate-starvation; Phosphate-starvation

リン酸飢餓条件下で発現する遺伝子の解析スサビノリをリン酸飢餓条件下で培養したときに誘導合成されるタンパク質にリン酸結合タンパク質(PBP)とホモログなタンパク質がある。平成13年度の研究からこのタンパク質をコードするcDNAをクローニングし、ノーザンブロット法により転写レベルで発現誘導されることを明らかにした。今回、抗体を作製するためにcDNAを発現ベクターにクローニングし、大腸菌内でHis Tagを含む融合タンパク質を大量に発現させた。さらにスサビノリの精製PBPを用いてウサギに免疫し、抗PBP抗体を作製した。次にリン酸飢餓状態で培養したスサビノリ葉状体をウェスタンブロット法で解析した結果、32kDaのPBPはリン酸欠乏によって経時的に誘導合成されることがわかった。スサビノリをリン酸飢餓条件下で培養したときに誘導合成されるタンパク質にアルカリ性ホスファターゼとリン酸結合タンパク質ホモログがある。平成13年度の研究からこれらのタンパク質をコードするcDNAをそれぞれクローニングしている。今回、スサビノリ葉状体から界面活性剤CTABを含むApt緩衝液を用いてゲノムDNAを調製した。さらにゲノムDNAを平均サイズ20kbに切断した後、多糖類を除去し、λEMBL3を用いてスサビノリのゲノムDNAライブラリーを作製し、プラークハイブリダイゼーション法によりゲノム遺伝子を含むファージクローンをそれぞれ単離した。サザンブロット法で目的の遺伝子領域を含む断片を特定し、プラスミドベクターにサブクローニングした。塩基配列を決定した結果、アルカリ性ホスファターゼ遺伝子とリン酸結合タンパク質ホモログ遺伝子の内部にはイントロンがそれぞれ存在しないことが明らかになった。

Analysis and synthesis of protein under acid-starved condition induced by culture and acid-starved condition induced by acid-starved condition induced by culture and synthesis of protein under acid-starved condition (PBP) induced by culture and acid-starved condition induced by culture and induction of protein under acid-starved condition induced by culture. The research conducted in 2003 showed that the gene expression of cDNA was induced by the gene expression method. Now, antibody production, cDNA discovery, His Tag discovery, large number of fusion proteins discovery in E. coli Today, the use of purified PBP in the production of anti-PBP antibodies The results of analysis and synthesis of 32kDa PBP in acid starved state were as follows: Under the condition of acid starvation, it is possible to induce the synthesis of organic compounds. The 13-year-old research conducted by Heisei University in Beijing has provided information on the quality of the cDNA. In this paper, we use CTAB as an interface active agent to modulate DNA. The average length of DNA was 20kb. After cleavage, polysaccharides were removed. λEMBL3 was used to control DNA fragmentation. The method of fragmentation was used to control DNA fragmentation. The target sub-domain contains fragments, and the target sub-domain contains fragments. The base alignment is determined as a result of the presence of a mixture of the elements in the interior of the matrix.