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オーキシン応答性遺伝子の発現を制御する転写因子の単離・構造解析

控制生长素响应基因表达的转录因子的分离和结构分析

基本信息

批准号：
13876025
负责人：
山根久和
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

イネ科植物根圏に棲息する窒素固定細菌は、窒素固定を行うだけでなく、インドール-3-酢酸(IAA)などの植物ホルモンを生産して植物の生長を促進する。そのような窒素固定細菌の一種であるA.lipoferum FSにおいて、IAA生合成の鍵酵素であるインドール-3-ピルビン酸デカルボキシラーゼの遺伝子(ipdC)のプロモーター領域近傍のinverted repeat sequence(IRS)に結合する2種のタンパク質の存在が示された。それらのうち、一方はオーキシンの添加の有無に関わらず結合能を有し、もう一方はオーキシンの存在下で結合能を失うことが明らかになっており、ipdCの発現がオーキシン依存性と非依存性の2種のDNA結合タンパク質(転写因子)によって制御されていると考えられる。そこで、本研究では、これら2種の転写因子をコードする遺伝子の単離を目的とした。A.lipoferum FSを大量培養し、得られた菌体の抽出液から、IRSとの結合活性を指標にして、陰イオン交換、アフィニティクロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーによって精製したところ、複数のIRS結合タンパク質の候補が得られた。そこで、UVクロスリンキング法により、さらに候補の絞込みを行った。現在、その有力候補のN末端及び内部アミノ酸配列の決定を試みている。一方、ipdC 5'上流域とレポーターのβ-glucuronidaseの融合遺伝子をA.lipoferum FSに導入した形質転換体を用いたレポータージーンアッセイを行ったところ、オーキシンによってipdC遺伝子の発現が誘導されるというA.brasilense Sp245と同様の結果が得られた。現在、より詳細なシスエレメントの解析を行っている。

Plant growth is promoted by the production and growth of plant organisms that inhabit and immobilize plant roots. A.lipoferum FS, a key enzyme for IAA biosynthesis, is identified by the inverted repeat sequence(IRS) near the IPDC domain, which combines two types of enzymes. In the presence or absence of the addition of the two kinds of DNA binding factors, the binding energy is present, the binding energy is lost, and the occurrence of the ipdC is dependent. In this study, there are two kinds of writing factors, which are different from each other. A.Lipoferum FS is cultured in large quantities, and the extract of the bacteria is obtained. The binding activity of IRS is determined by the index of anion exchange, anion exchange, filtration, purification, and complex IRS binding activity.そこで、UVクロスリンキング法により、さらに候补の绞込みを行った。Now, the N-terminal and the internal components of the strong candidate are tested for acid alignment. The fusion gene of β-glucuronidase in ipdC 5'upper watershed was introduced into A.lipoferum FS, and the same results were obtained. Now, the details of the game are analyzed.